2018-04-14
org.kosen.entty.User@25a27c1d
유선희(downsky7)
- 1
첨부파일
After, ion-exchange chromatography, we got the first result (1st photo).
-cation exchange chromatography
-Asp, His, Arg
-Buffer solution (pH 4.0, 8.5, 11.0)
-filter paper & ninhydrin (110℃ oven)
And then using TLC, (silica gel plate), we got the second result.
-spot (1st result material no.6, 7, 79, 80 + standard amino acid Asp, His, Arg)
-Butanol:acetic acid:water = 12:3:5
-dry + ninhydrin (2% acetone) + dry + 110℃ oven
생화학 실험에서, 아미노산을 양이온 크로마토그래피로 분리 후
닌하이드린 반응을 이용하여 정성분석을 시도하였습니다.
그러나 TLC 전개 후, 닌하이드린 용액을 뿌리고
발색을 위해 오븐에 들어갔다 나온 plate에서
어떤 값을 도출해야하는 지 잘 모르겠더라구요 ㅠㅠ
혹시나 제대로 된 건조과정에 문제가 있어서 그런 것인지 확인하기 위해
세 번째 사진에서 2번 플레이트는 ninhydrin을 뿌리자마자 젖은채로 오븐에 넣었고,
3번 플레이트는 시약을 뿌린 후 건조후에 오븐으로 들어가 발색시켰는데
1번 플레이트보다 더 엉성한 결과가 나와서 당황했습니다..
1. 크로마토그래피 후 종이에서 닌히드린 반응 후(오븐 발색후) 정확히 발색이 어떤 색이어야 하는지
2. 아미노산 TLC 전개 후 발색을 성공적으로 하려면 어떻게 해야하는지..
3. 저희가 본 결과값을 확인할 수 없는 이유가 아미노산 자체 농도가 너무 낮아서 그런 것인지..
질문드립니다 ㅠㅠ.
-cation exchange chromatography
-Asp, His, Arg
-Buffer solution (pH 4.0, 8.5, 11.0)
-filter paper & ninhydrin (110℃ oven)
And then using TLC, (silica gel plate), we got the second result.
-spot (1st result material no.6, 7, 79, 80 + standard amino acid Asp, His, Arg)
-Butanol:acetic acid:water = 12:3:5
-dry + ninhydrin (2% acetone) + dry + 110℃ oven
생화학 실험에서, 아미노산을 양이온 크로마토그래피로 분리 후
닌하이드린 반응을 이용하여 정성분석을 시도하였습니다.
그러나 TLC 전개 후, 닌하이드린 용액을 뿌리고
발색을 위해 오븐에 들어갔다 나온 plate에서
어떤 값을 도출해야하는 지 잘 모르겠더라구요 ㅠㅠ
혹시나 제대로 된 건조과정에 문제가 있어서 그런 것인지 확인하기 위해
세 번째 사진에서 2번 플레이트는 ninhydrin을 뿌리자마자 젖은채로 오븐에 넣었고,
3번 플레이트는 시약을 뿌린 후 건조후에 오븐으로 들어가 발색시켰는데
1번 플레이트보다 더 엉성한 결과가 나와서 당황했습니다..
1. 크로마토그래피 후 종이에서 닌히드린 반응 후(오븐 발색후) 정확히 발색이 어떤 색이어야 하는지
2. 아미노산 TLC 전개 후 발색을 성공적으로 하려면 어떻게 해야하는지..
3. 저희가 본 결과값을 확인할 수 없는 이유가 아미노산 자체 농도가 너무 낮아서 그런 것인지..
질문드립니다 ㅠㅠ.
- 아미노산
- Ninhydrin
- 정성 반응
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
답변 1
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답변
김인호님의 답변
2018-04-17- 2
1. 크로마토그래피 후 종이에서 닌히드린 반응 후(오븐 발색후) 정확히 발색이 어떤 색이어야 하는지: 보라색(분석기로 정량시 검출기에는 보라색 농도를 OD 값으로 환산 검출)
2. 아미노산 TLC 전개 후 발색을 성공적으로 하려면 어떻게 해야하는지: TLC 인지 Paper chromatography(PC)인지 명확히하여야 하며 PC의 겨우 발색 부분을 오려 용출 후 분광광도계로 정량합니다.
3. 저희가 본 결과값을 확인할 수 없는 이유가 아미노산 자체 농도가 너무 낮아서 그런 것인지..
결론
1) 표준액을 농도별(0.1%, 0.5% 등)로 만들어 정량 그래프를 만듭니다.
2) 표준액을 이용한 TLC 확인 후 시료의 농도가 낮아 발색이 되지 않은 경우 농축하면 좋음
3) TLC 또는 PC 확인 실온에서 건조시킨후 오븐에서 건조하면 번지지 않음
4) 분석실험은 확신이 들때 까지 반복하세요 값을 신뢰할 수 있어야 하니까요