2019-04-11
org.kosen.entty.User@449187ee
성경주(skj)
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생쥐(c57bl6)에 방사선 조사 후 특정 케미컬을 처리하여 해마신경발생의 변화를 확인했습니다. 행동발달테스트와 함께 dentate gyrus (치아이랑)에 골지 염색을 하여 분석할 예정입니다. 염색을 위해 FD Rapid GolgiStain™ Kit (FD NeuroTechnologies)를 사용합니다. 처음 시도하는 실험이라 염색과정에서 궁금한점이 있어 골지 염색 경험이 있는 선생님들의 조언이 필요합니다.
1. 보통 brain histology를 할때 관류고정을 한 후 뇌 적출을 하는데..골지 염색을 할때는 관류고정(뇌조직 염색시 필수사항)법을 추천하지 않는다고 프로토콜에 적혀있는데요..특별한 이유가 있는지요..
2. Frozen section: brain embedding solution으로 leica FSC 22 clear frozen section compound 사용 가능 여부..즉 kit 프로토콜에서 제시하는 시약이 아님 제품을 사용해본적이 있으신지....
3. brain section 샘플 보관을 오직 키트에 포함된 solution C만을 사용해야 하는지..(보통 조직염색을 위해 storage solution (glycerin+glycol+PB버퍼)을 만들어서 보관했었습니다.
4. 150um로 섹션을 한 후 Z-STACK으로 이미지를 찍을 계획인데 샘플 두께가 결과에 많은 영향을 미치는지가 궁금합니다..
제조사에 문의 해서 2주만에 답변을 받았지만......
1. 보통 brain histology를 할때 관류고정을 한 후 뇌 적출을 하는데..골지 염색을 할때는 관류고정(뇌조직 염색시 필수사항)법을 추천하지 않는다고 프로토콜에 적혀있는데요..특별한 이유가 있는지요..
2. Frozen section: brain embedding solution으로 leica FSC 22 clear frozen section compound 사용 가능 여부..즉 kit 프로토콜에서 제시하는 시약이 아님 제품을 사용해본적이 있으신지....
3. brain section 샘플 보관을 오직 키트에 포함된 solution C만을 사용해야 하는지..(보통 조직염색을 위해 storage solution (glycerin+glycol+PB버퍼)을 만들어서 보관했었습니다.
4. 150um로 섹션을 한 후 Z-STACK으로 이미지를 찍을 계획인데 샘플 두께가 결과에 많은 영향을 미치는지가 궁금합니다..
제조사에 문의 해서 2주만에 답변을 받았지만......
- GolgiStain
- dentate gyrus
- neurons
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
답변 1
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답변
한민준님의 답변
2019-04-18- 2
CLARITY를 이용하시는것은 어떨까요?
https://hcbi.fas.harvard.edu/news/x-clarity-tissue-clearing-system-has-arrived
주변에 lightsheet 현미경을 이용하실수 있다면 이 방법이 전체구조를 확인하는데 더 좋은 방법입니다.