2020-01-02
org.kosen.entty.User@4fff28ec
성경주(skj)
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C57BL/6에 photothrombotic ischemic stroke model을 만들어서 saline으로 관류(perfusion)과정을 거친 후 TTC 염색을 통해 infarct region을 확인하고 있습니다. 관류 후 뇌조직을 분리하여 TTC 염색을 위해 brain matrix 장치(1mm)를 이용해 조직을 자른 후 slide에 붙여서 infarct size를 스캐너로 스캔 후에 확인하고 있습니다. 여기서 도움이 필요한 부분은 스캐너로 스캔을 할때 컷팅한 조직이 뭉쳐서 접히거나 타겟 (infarct region)이 잘려지는 현상이 자주 발견되어 이 실험에 들어갈때 주위사항이 필요한지요...경험자분의 도움이 필요합니다.
- TTC 염색
- Stroke
- neuron
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 2
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답변
변경필님의 답변
2020-01-06- 2
뇌 조직은 금방 흐물 흐물 해지기 때문에
PBS로 만든 10% FA나 4% PFA로 고정(4℃, 차광)하여 사용 해 보세요.
좋은 결과가 있길 빌겠습니다.
변경필(wowphils) 2020-01-07제가 알려드린 내용는 염색 후 고정하는 것입니다. 선생님께서 염색 후 고정을 하셨다면, 추가로 제시 해드릴 수 있는 주의 사항은 1. 뇌 적출후 절편제작(칼날 상태확인 필수) 및 TTC 염색전까지 10분이내로 작업, 2. 절편을 다시 냉동 절편(40um)으로 절삭시 floating시 30% sucrose +30% glycol in PBS 또는 PBS를 이용하고, 절편 후 TTC 염색 전까지 실온 방치 시간을 최대 2~3 분이내, 3. 스캔시 고정액이 바닥에 얇게 깔린 스캔용 용기(plate 등) 위에 절편올려 스캔, 등 입니다. ^^;
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답변
강경돈님의 답변
2020-01-29- 0
위에 분이 잘 답변해주셨는데요.
뇌 조직을 염색하기 위해서 보통 PBS와 4% paraformaldehyde로 perfusion한 후 formalin으로 24-48시간 fix, 그리고 70% ethanol로 옮긴 후 paraffin 처리하는 방법을 일반적으로 거칩니다.
좋은 결과 있기를 응원합니다. ^^
4% PFA 처리는 컷트 후 TTC로 20분정도 염색 한 다음 진행하는데요. 선생님 말씀은 blade로 자르기 전에 먼저 뇌조직을 4% PFA로 고정시킨다는 말씀이신가요?