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지식나눔

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mitochondrial membrane potential 평가할 때 질문드립니다.

2020-10-26 org.kosen.entty.User@527829ad 조수호(kist22)
  • 2

첨부파일

mitochondrial membrane potential 활성을 평가하기 위해 facs analysis하여 FlowJo calculate하여 첨부한 것과 같이 그림이 나옵니다. 여기서 제가 궁금한 것은 43%, 29.1% 값이 어떻게 나오는지 궁금합니다. 값이 %이므로 분자/분모X100 일텐데 구체적으로 분모와 분자가 무엇인지 궁금합니다. 계산법 알고 싶습니다. 감사합니다. 
논문도 첨부하였습니다. 
  • mitochondrial membrane potential
  • kidney
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답변 2
  • 답변

    한민준님의 답변

    2020-10-27
    • 3
    TMRE는 active 한 mitochondria를 보여주기 위함입니다. 
    alb+FFA를 처리할 경우 mito ROS가 증가하며 membrane potential이 (Depolarized or inactive mitochondria) 떨어진다고 그림에서 주장하는 거 같습니다. 
    그림 9B와 9C는 같은 실험인데
    그림 9B는 형광현미경을 사용하여서 intensity를 직접 보여주었고 
    그림 9C는 flow를 이용해 quatitative한 결과를 보여주고 있습니다. 여기서 사용된 숫자는 flowjo를 이용해서 만든 gating에 의해서 나온 숫자입니다. 엄밀하게 이야기하면 TMRE staining을 하지 않은 negative control에서 gating을 잡고 여기에 따라서 각각 control, alb+FFA, alb+FFA+dh404의 값이 얼마인지를 보여주어야 하는데 논문에서는 negative가 생략이 되어있네요. 
    아래와 같이 negative로 gating을 잡고 (---|   |--- 이렇게 표시된) 여기를 기준으로 얼마나 TMRE (PE) signal이 잡히는지를 % (분모는 전체 cell number 분자는 positive cell number)로 표현하게 됩니다.  


     
    답변수정
    TMRE는 active 한 mitochondria를 보여주기 위함입니다. 
    alb+FFA를 처리할 경우 mito ROS가 증가하며 membrane potential이 (Depolarized or inactive mitochondria) 떨어진다고 그림에서 주장하는 거 같습니다. 
    그림 9B와 9C는 같은 실험인데
    그림 9B는 형광현미경을 사용하여서 intensity를 직접 보여주었고 
    그림 9C는 flow를 이용해 quatitative한 결과를 보여주고 있습니다. 여기서 사용된 숫자는 flowjo를 이용해서 만든 gating에 의해서 나온 숫자입니다. 엄밀하게 이야기하면 TMRE staining을 하지 않은 negative control에서 gating을 잡고 여기에 따라서 각각 control, alb+FFA, alb+FFA+dh404의 값이 얼마인지를 보여주어야 하는데 논문에서는 negative가 생략이 되어있네요. 
    아래와 같이 negative로 gating을 잡고 (---|   |--- 이렇게 표시된) 여기를 기준으로 얼마나 TMRE (PE) signal이 잡히는지를 % (분모는 전체 cell number 분자는 positive cell number)로 표현하게 됩니다.  


     
    조수호(kist22) 2020-10-28

    궁금한 내용 친절히 알려주셔서 진심으로 감사드립니다.

  • 답변

    장성재님의 답변

    2020-10-27
    • 3
    일반적으로 FACS 데이터를 정량화하여 보여주는 그래프입니다.
    게이팅을 통하여 표적 세포만을 대상으로 x축은 형광 intensity, y축은 세포의 수이므로, 측정한 세포들의 형광 강도들의 합을 100%로 표현한 것(면적; 피크로 표시된 그래프의 적분값) 이고, 상단 막대로 표시한 부분의 제한된 부분의 그래프 면적을 대조군(43%), BSA+FFA 처리군(29.1%), BSA+FFA+dh404 처리군(41%)과 비교하여 대조군에 drug 처리를 했을 때 변화한 양을 표시한 겁니다.
    결과적으로 논문에서는 mitochondrial membrane potential이 BSA+FFA 처리에 의해서 감소했다가 dihydro-CDDO-trifluoroethyl amide (dh404) 처리에 의해 회복되었다는 내용입니다.
    답변수정
    일반적으로 FACS 데이터를 정량화하여 보여주는 그래프입니다.
    게이팅을 통하여 표적 세포만을 대상으로 x축은 형광 intensity, y축은 세포의 수이므로, 측정한 세포들의 형광 강도들의 합을 100%로 표현한 것(면적; 피크로 표시된 그래프의 적분값) 이고, 상단 막대로 표시한 부분의 제한된 부분의 그래프 면적을 대조군(43%), BSA+FFA 처리군(29.1%), BSA+FFA+dh404 처리군(41%)과 비교하여 대조군에 drug 처리를 했을 때 변화한 양을 표시한 겁니다.
    결과적으로 논문에서는 mitochondrial membrane potential이 BSA+FFA 처리에 의해서 감소했다가 dihydro-CDDO-trifluoroethyl amide (dh404) 처리에 의해 회복되었다는 내용입니다.
    조수호(kist22) 2020-10-28

    이해하기 쉽고 자세한 설명 진심으로 감사드립니다.

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