2020-12-03
org.kosen.entty.User@286df0bd
조수호(kist22)
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western blot 에서 cell death marker인 santa cruz의 PARP-1과 caspase3를 보려고 합니다.
하지만 PARP-1만 detection이 됩니다.
조사해보니 PARP-1과 Caspase3의 pathway를 알아보니 Caspase3의 downstream이 PARP-1이라고 합니다. 제가 궁금한 것은 Caspase3이 detection되지 않는 이유가 이미 세포가 apoptosis가 발생되어 PARP-1 단계에만 해당되는 세포만 있을 수 있는지 이점이 궁금합니다.
감사합니다.
하지만 PARP-1만 detection이 됩니다.
조사해보니 PARP-1과 Caspase3의 pathway를 알아보니 Caspase3의 downstream이 PARP-1이라고 합니다. 제가 궁금한 것은 Caspase3이 detection되지 않는 이유가 이미 세포가 apoptosis가 발생되어 PARP-1 단계에만 해당되는 세포만 있을 수 있는지 이점이 궁금합니다.
감사합니다.
- western blot
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답변 4
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답변
한민준님의 답변
2020-12-03- 3
제가 보기엔 antibody 문제일 가능성이 더 높은거 같습니다.
산타 제품은 actin이나 GAPDH를 제외하고는 거의 사용하지 않습니다...ㅠㅠ
개인적으로 cell signaling 제품을 주로 사용합니다.
cell death (엄밀히 apoptosis) signaling을 보시는 것 같은데요.
이 경우는 cleaved form을 확인하시는 것이 더 중요합니다.
PARP-1/ cleaved PARP-1
Cas-3/ cleaved Cas-3 이렇게 확인하시면 보다 정확한 정보를 얻으실 수 있을거 같습니다.
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답변
김헌성님의 답변
2020-12-18- 3
caspase-3의 전체가 detection이 안되는 것인지 cleaved form이 detection이 안되는 것인지 궁금합니다. 만약 caspase-3의 전체가 detection이 안되는 것이면 antibody문에 문제가 있는 것이고
cleaved form이 detection이 안되는 것이면 apoptosis가 caspase-3까지 이어지지 않은 것 같습니다.
약물의 농도나 시간을 늘려보시는 것이 좋은 것 같습니다.
제가 알기기로는 caspase-3가 PARP보다 down stream인걸로 알고 있는 데요
확인해 보시길 바랍니다. -
답변
박애리님의 답변
2020-12-11- 2
제가 알기로는 caspase-3가 가장 마지막에 일어나는 것으로 알고 있습니다
위에서 조언 해주셨다시피 cleaved caspase-3, cleaved PARP를 보는 것이 정확합니다
apoptosis 보려면 hoechst staining 을 통해서도 DNA fragment 를 확인 할수도 있고
DNA를 gel 을 내리면 역시 fragment도 볼 수 있습니다
FACS 통해서도 볼 수 있습니다
이렇게 여러가지 방법을 말씀드리는 건 세포가 사멸하는데 꼭 apoptosis 만 일어나는 것이 아니기 때문에
다양한 실험 방법을 통해 apoptosis 검증하시는데 참고 하시면 좋을 듯하여 몇자 남깁니다. -
답변
이광호님의 답변
2020-12-16- 2
윗분들 답변에 동감합니다.
그렇지만 저도 가장 첫번째로 의심이 되는건 santa cruz 제품이라는 것입니다.
제안해주신 방법을 모두 다 해보고 다른여러가지 시그날링을 더 공부해서 해당하는 근처의 주변을 샅샅히 확인해보는것이 중요합니다.
그런데 추가적으로 santa cruz 제품을 의심해보는 것도 필요합니다. (이런 경우가 좀 있고, 학문적으로 추적하다보면 놓칠수 있는 부분이라서 한번더 말해보았습니다.)