2021-05-27
org.kosen.entty.User@7131964
손영옥(sounagi1)
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세포에서 RNA를 추출하여 cDNA를 만들어 RT-PCR을 하고 있습니다.
그런데 Chemical inhibitor을 처리하고 똑 같이 RNA을 추출하는데 이번에는 RNA가 DEPC-water에 녹지 않습니다.
이런 경험 있으신분 계시는지요? 어떻게 해결하셨는지요?
감사합니다.
그런데 Chemical inhibitor을 처리하고 똑 같이 RNA을 추출하는데 이번에는 RNA가 DEPC-water에 녹지 않습니다.
이런 경험 있으신분 계시는지요? 어떻게 해결하셨는지요?
감사합니다.
- RNA
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답변 3
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답변
한민준님의 답변
2021-05-27- 1
RNA가 녹지 않는다는 의미가 무엇이죠? 혹시 IPA precipitation을 하고 나서 pellet이 녹지 않는다는 것인가요?
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답변
김헌성님의 답변
2021-05-31- 1
추출한 RNA을 완전히 건조시키지 않은 상태에서 녹이면
그럴 가능성이 있습니다.
아니면 polysaccharide가 섞여 있을 경우에 녹지 않은 경우도
있습니다. -
답변
변경필님의 답변
2021-06-14- 0
1. proteoglycans, polysaccharides류가 많이 포함되어 그럴수 있습니다. (rat liver, rat aorta, plants 등의 경우)
(Trizol을 사용하는 경우)0.25 mL isopropanol+0.25 mL 고염 침전액(high-salt precipitation sol.(0.8 M sodium citrate, 1.2 M NaCl)을 사용하시면 proteoglycans, polysaccharides류를 제거 할 수 있습니다.
2. 만약 pellet 이 투명하지 않고 흰색이면 제거되지 않은 단백질이 많이 있어서 그렇습니다. 단백질 제거에 신경을 쓰시면 됩니다.
3. RNA를 건조 시킬때 isopropanol만 충분히 제거하고 장기간 건조 시키지 않은 상태에서 수화를 시키면 잘 녹습니다.
4. 용액을 넣은 다음 60~70°C water bath에서 10~15분간incubation 시킨 후 vortex하여 원심분리를 하거나 약간의 NaOH용액을넣어주면 더 잘 용해됩니다. 단 차후 시험에 따라 본 방법의 사용 여부를 결정하세요.
참고로, 재용해 후 장기간 보관할 예정이면 TE (10mM Tri-HCl (pH8.0), 0.1mM EDTA) Buffer 에 녹이는 것이 좋습니다.(더 잘 용해되기도 하고)