2024-01-17
org.kosen.entty.User@7ad07e32
익명
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Vector를 enzyme cut하고 난 뒤 self ligation이 돼지 않도록 phosphatase를 처리해 주는데,
Insert로 넣어줄 PCR product의 경우에는 primer를 디자인하고 PCR을 해서
5'과 3'에 다른 enzyme이 달려 있게 해서 PCR product는 self ligation이 되진 않겠지만
찾아보니 PCR할 때 사용하는 primer는 5'에 인산기가 없다고 하더군요.
그럼 vector도 phosphatase에 의해 인산기가 없을 거고 PCR product도 인산기가 없다면 어떻게 ligation을 하나요?
- Subcloning
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답변 1
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한민준님의 답변
2024-01-18- 1
Ligase를 PCR product를 바로 사용해서 이용하지 않죠.
restriction enzyme으로 PCR product를 자르게 되고 이때 phosphate group이 남아 있어서
ligation에 문제 없습니다.