지식나눔

Western blot background 제거

western blot 후 membrane에 ECL을 뿌려서 detection하는 과정에서

처음엔 약한 강도(omitto)의 ECL로  먼저 확인을 합니다.

그런데 신호가 너무 약해서 detection이 안되면 강도가 쎈(femto) ECL을 뿌리고 detection합니다.

왠만하면 다 femto에서 background 없이 detection이 되는데

유독 한 cell의 하나의 target에서만 background가 심하게 나옵니다.

membrane을 필름 위에 올리고 pipette으로 ECL을 뿌린 다음 다른 필름으로 밀착되게 덮은 후에 detection하는데요

ECL을 뿌린 모양대로 background가 나옵니다.

그냥 membrane을 ECL에 담그듯이 넣었다 뺀 후 detection하면 전체적으로 background가 보이구요

Blocking도 더 오래하고 1차 항체 농도도 낮추고 했는데 여전합니다.

단백질 양을 줄이기엔 신호가 너무 약하게 나와서 아직 해보진 않았습니다.


해결할 수 있는 방법이 없을 까요


  • western blot
  • background
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답변 1
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    한민준님의 답변

    ECL에 femto를 10-20% 섞어서 사용하셔도 됩니다. 

    (ECL reagnet1 400uL+ reagent2 400uL+ femto reagent1 100uL+femto reagent2 100uL)

    이런식으로 섞어서 사용했었습니다. 

    이러면 약한 시그널도 어느정도 백그라운 지저분한거 없이 잡힙니다. 

    ECL에 femto를 10-20% 섞어서 사용하셔도 됩니다. 

    (ECL reagnet1 400uL+ reagent2 400uL+ femto reagent1 100uL+femto reagent2 100uL)

    이런식으로 섞어서 사용했었습니다. 

    이러면 약한 시그널도 어느정도 백그라운 지저분한거 없이 잡힙니다. 

    비공개 2024-05-28

    제가 사용하는 ECL femto 시약은 femtro reagent 1과 2를 섞어서 바로 사용하는 제품인데요
    DW에 희석해서 사용해도 될 까요?