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안녕하세요, 의학 계열 종사 중인 학생입니다.
실험에서 HPLC-MS를 이용하려고 하는데, 관련 지식이 부족하여 여러 선생님들의 의견을 구하고자 합니다.
사람 혈장에서 특정 지방산에 대해 정성/정량 분석을 진행하려 하는데, 외부에 검사를 의뢰하려 했으나 생각보다 비용이 많이 들더라고요.
견적서를 보니 특히 method development에 많은 비용이 측정되어 있습니다.
비용 문제로 학교 공동기기실에 있는 HPLC-MS 장비로 직접 실험하려 하는데, 혈장에서 HPLC-MS를 이용하여 지방산을 분석한 선행논문이 많아 논문에서 사용한 전처리 방법이나, 세팅값, 컬럼 등을 차용할 생각입니다. 이게 가능할지 직접 실험하시는 분들의 생각이 궁금합니다.
보통 HPLC-MS를 진행할 때 method development 과정이 필수적으로 필요한가요..? 논문에 나와 있는 방법만으로 HPLC를 진행하는 것이 어려울지 알려주시면 감사하겠습니다. 그리고 직접 HPLC를 사용하는 랩실에서는 어떤 방식으로 실험을 진행하는지 궁금합니다!
전공자가 아니라서 부족한 점이 많습니다ㅜ 너그럽게 봐주시면 감사하겠습니다.
감사합니다!
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- HPLC
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변
안용운님의 답변
2024-06-03- 2
안녕하세요.
저는 임상시험 및 생체시료분석기관에서 분석법개발을 하고 있습니다.
정성분석 또는 정량분석, 특히 정량 분석에는 검증된 분석법이 필요합니다.
질의 주신 분께서 어떤 성분에 농도를 알고 싶어 분석을 의뢰하고, 결과를 받았을때 과연 그 결과가 타당한지를 확인하여야 합니다.
그 과정중에 HPLC의 chromatography와 MS의 이온화 최적화, 그리고 생체시료내 정제과정 등이 설정되어야 시료분석의 타당성이 입증될수 있습니다.
그것을 분석법 개발을 통해 확인후 시료분석이 진행되는 과정이라고 이해하시면 됩니다.
저도 거의 20년이상 분석을 하고 있으나, 논문의 방법이 현상황, 현지에서 재현되기는 매우 어렵습니다.
또한 분석 논문이라고 해도 핵심내용은 빠져 있는 경우가 많고, 논문에 따른 환경과 장비 시약 등등 100% 동일하게 실험하기에는
외부기관에 의뢰가 훨씬 쉬울수 있습니다.
또한 결과에 목적에 따라서 분석법 개발이 비용이 많아질수 있습니다.
보통 규제기관에 제출용 분석이라면 아래와 같이 진행됩니다.
분석법 개발=>밸리데이션(개발된 분석법의 타당성, 검증)=>시료분석
그리고 문의내용중 지방산으로 확인되어집니다. 지방산에서도 종류가 매우 많으며, 생체내 내인성 물질이 많아 분석이 난이도가 매우 높습니다.
짧게나마 간단히 정리드렸는데, 도움되셨으면 합니다.
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답변
조윤환님의 답변
2024-06-04- 2
method development 라는 것이 앞서 답변하신 분의 설명처럼 분석법을 검증하는 과정이 포함되어 있습니다. 따라서 비용이 많이 드는 것입니다. 검증 이라는 것이 단순히 정량의 정확성을 확인하는 것이 아니라 시료의 전처리과정 정량의 범위, 한계 등을 확인하는 것입니다.
특히 질문 주신 분의 경우처럼 생체시료 라면 더욱 더 분석법 개발이 복잡할 수 밖에 없습니다.
논문에 쓰여 있는 그대로 실험하면 될 것 같지만, 특히나 LC-MS는 경험이 많이 필요한 분석입니다. 시도해보시길 권하고 싶지만 시행착오를 거치면서 시간 소모가 너무 많고, 제대로 된 결과도 얻지 못할 가능성이 높아 추천하기 어렵습니다.