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PBMC로부터 분리된 면역세포를 배양했습니다.
positive control, negative control, 제 시료 1~3 총 5가지 조건으로 실험했습니다.
배양 4일차부터 배양 14일차까지 동일한 양상인데요.
원래 Positive control은 배양 초기부터 최소 2배 이상씩 면역세포가 증식하고 log를 그리면서 증식합니다
그런데 무슨 일인지 증식하지 않고 초기 seeding cell 수를 유지합니다.
이 상황에 negative control은 약 20% 감소된 상태로 cell 수를 유지하고 있고
제 시료 2, 3번도 마찬가지로 초기 seeding cell 수를 유지합니다.
이 와중에 제 시료 1번 처리에서만 세포 수가 log level로 증식합니다.
초기 seeding cell 수 대비 약 80배 정도 증식했습니다
이게 무슨 일일까요?
이 실험 결과에 대해 어떻게 해석해야 할까요?
- PBMC
- 면역 세포
- 세포 증식
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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한민준님의 답변
2024-07-16- 1
사실 이 data만을 가지고 실험 결과를 도출해서 결론을 내리기는 좀 어렵고 위험합니다.
이런 실험들은 patient dependent할 수 있기 때문에
결과가 환자 specific 한 것인지 확인해 볼 필요는 있구요
또한 positive에서 cell이 증식하지 않았다면 배양 조건을 의심해 보아야 할 거 같습니다.
혹시 PBMC로 부터 분리된 면역세포를 키우는 media와 growth factor를 최근에 바꾼 것이 있나요?
그리고 media는 master mix를 만들어서 사용하는 것인가요? 시료 1번 처리에만 제대로 들어가고 나머지는 missing component가 생길 가능성이 있나요?
한민준(mjbio) 2024-07-16human serum과 FBS가 많이 달라서 다른 결과가 나올수도 있습니다. 이러한 경우는 기존방식 (자가 혈장을 사용한 media)을 control로 넣어서 실험을 진행하는것이 좋을거 같습니다.
최소 10회 이상 수행한 pc 실험에서는 로그 그래프를 그렸고요
물론 그 때도 매 번 다른 PBMC로 했습니다.
그러니까 이번 결과가 더 이상한 거예요.
PC 실험이 한 두 번이 아닌데, 얘가 왜 이러는지요...
배지와 IL-2 및 사용되는 항체 등은 이전에 사용하던 것을 계속 사용했고
최근에 바꾼 것은 FBS 입니다.
계속 자가 혈장 사용하다가 FBS로 해 보자고 해서 새롭게 구매해서 사용했습니다.
그리고 media는 오류가 생길 수도 있어서 master mix를 만들어서 사용했고요.
시료 1~3번은 처리 방법이 동일하기 때문에 동일한 프로세스로 준비해서 배양물에 처리했습니다.
즉, 제대로 넣었다는 얘기입니다.
다만, 제 시료 1~3번은
전혀 다른 배양 조건이어서
시료 1번에 들어 있는 물질이 2번에는 극미량 들어 있고 3번에는 아예 없습니다.
물질 프로파일이 전혀 다릅니다.