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Elastase를 1U/mL in 0.1M Tris buffer(pH 8.0)로 만드려고 합니다.
계산하는 방법을 찾아보았으나 어떻게 계산해야 될 지 모르겠습니다.
도움 부탁드립니다.
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변
박소원님의 답변
2024-08-27- 1
Elastase를 1u/mL in Tris buffer로 만들기 위해서는 먼저 엘라스타제와 트리스 버퍼의 농도를 정확히 계산해야 합니다. 아래에 그 과정을 설명하겠습니다.1. 기본 정보 수집:- 엘라스타제의 활성 단위(U/mg)와 분자량(g/mol)을 확인합니다. 예를 들어, Bacillus subtilis에서 생산된 엘라스타제는 분자량이 약 25,000 Da입니다 [2].
- 사용하려는 Tris buffer의 농도와 pH 조건을 설정합니다. Tris buffer는 일반적으로 50 mM에서 100 mM 농도로 사용되며, pH는 7.5에서 9.0 사이입니다 [1][4].
2. 필요한 엘라스타제 양 계산:- 1 u/mL의 활성도를 갖는 엘라스타제 용액을 만들기 위해 필요한 엘라스타제의 양을 계산합니다. 엘라스타제의 활성 단위(U/mg)가 주어졌다고 가정하면, 필요한 엘라스타제의 질량은 다음과 같이 계산됩니다:
3. Tris buffer 준비:- Tris buffer는 50 mM 농도로 준비할 수 있습니다. 이를 위해 50 mM Tris-HCl 용액을 준비합니다. 예를 들어, 50 mM Tris-HCl 용액을 1 리터 준비하려면 약 6.057 g의 Tris를 증류수에 녹이고 pH를 HCl로 조절합니다 [6].
4. 엘라스타제 용액 준비:- 필요한 양의 엘라스타제를 Tris buffer에 녹입니다. 예를 들어, 1mL의 용액을 준비하려면, 계산된 엘라스타제의 질량을 50 mM Tris-HCl 용액에 녹입니다.
구체적인 예를 들어 설명하겠습니다. 엘라스타제의 활성도가 10 U/mg이라고 가정하고, 1 u/mL의 용액을 1 mL 준비하려면:
따라서 0.1 mg의 엘라스타제를 1 mL의 50 mM Tris-HCl (pH 8.0) 용액에 녹이면 1 u/mL의 엘라스타제 용액이 준비됩니다.이 과정에서 중요한 점은 Tris buffer가 엘라스타제의 구조와 활성을 안정화시키는 능력입니다 [1][3]. 또한, Tris buffer는 대부분의 생물학적 시스템에서 호환성이 높아 실험에 적합합니다 [4][5].참조문헌[1] Frosco, M., Chase, T., & Macmillan, J. D. (1992). Purification and properties of the elastase from Aspergillus fumigatus. Infection and Immunity, 60, 728 - 734.[2] Kaur, M., Tripathi, K. K., Gupta, M., Jain, P., Bansal, M., & Gupta, K. (1988). Production and partial characterization of elastase of Bacillus subtilis isolated from the cervices of human females.. Canadian journal of microbiology, 34 7, 855-9 .[3] Ibrahim-Hashim, A., Abrahams, D., Enriquez-Navas, P., Luddy, K., Gatenby, R., & Gillies, R. (2017). Tris？base buffer: a promising new inhibitor for cancer progression and metastasis. Cancer Medicine, 6, 1720 - 1729.[4] Shieh, I., Lee, C., & Shiea, J. (2005). Eliminating the interferences from TRIS buffer and SDS in protein analysis by fused-droplet electrospray ionization mass spectrometry.. Journal of proteome research, 4 2, 606-12 .[5] Taha, M., & Lee, M. (2010). Interactions of TRIS [tris(hydroxymethyl)aminomethane] and related buffers with peptide backbone: thermodynamic characterization.. Physical chemistry chemical physics : PCCP, 12 39, 12840-50 .[6] Nagaj, J., Stokowa-Sołtys, K., Kurowska, E., Fr？czyk, T., Je？owskaBojczuk, M., & Bal, W. (2013). Revised coordination model and stability constants of Cu(II) complexes of tris buffer.. Inorganic chemistry, 52 24, 13927-33 .본 답변은 틀루토(tlooto.com)에서 참조하였습니다 :) -
답변
박소원님의 답변
2024-08-29- 1
댓글로 질문하신 내용의 tlooto.com 추가 답변입니다!
우선 주어진 정보를 정리해 보겠습니다.
Elastase의 활성도는 4.0 units/mg protein입니다.
현재 용액(3.09 mL)에는 9.3 units/mg protein의 활성도를 가지는 elastase가 있으며, 총 8.1 mg의 단백질이 포함되어 있습니다.
목표는 1 U/mL의 elastase 용액을 0.1M Tris buffer(pH 8.0)로 만드는 것입니다.
Step-by-Step Calculation
1. 총 활성도 계산: 주어진 용액의 총 활성도를 계산합니다.
총 활성도 (units)=9.3 units/mg protein×8.1 mg protein=75.33 units
2. 현재 용액의 볼륨 확인:
총 볼륨=3.09 mL
3. 현재 용액의 활성도 계산:
4. 희석 계산: 우리는 1 U/mL의 최종 활성도를 원하므로, 희석 비율을 계산해야 합니다.
5. 필요한 최종 볼륨 계산:
최종 볼륨=3.09 mL×24.38
75.38 mL6. 추가할 Tris buffer 계산:
추가할 Tris buffer의 양=75.38 mL - 3.09 mL=72.29 mL
따라서, 1 U/mL의 elastase 용액을 만들기 위해서는 현재의 elastase 용액 3.09 mL에 0.1M Tris buffer(pH 8.0)를 72.29 mL 추가하면 됩니다.
참고 문헌에서 얻을 수 있는 추가 정보
연구 문헌 [1]에 따르면, elastase는 다양한 생리적 및 병리적 상황에서 중요한 역할을 합니다. 예를 들어, elastase의 활성은 조직 파괴 및 염증 반응에서 중요한 역할을 하며, 이는 염증 상황에서 elastase 농도의 증가로 나타날 수 있습니다. 또한, 연구 문헌 [2]는 elastase의 정량적 측정 방법을 설명하며, elastase 활성의 정확한 측정을 위한 다양한 방법을 제시하고 있습니다. 이 정보는 elastase의 활성도를 정확하게 조절하고 측정하는 데 있어 유용할 수 있습니다.
이와 같이, elastase의 활성도와 관련된 다양한 연구 결과들은 elastase 용액을 준비하는 데 있어 중요한 참고 자료가 될 수 있습니다 [1][2].
참조문헌
[1] Rust, L., Messing, C. R., & Iglewski, B. (1994). Elastase assays.. Methods in enzymology, 235, 554-62 .
[2] Okumura, Y., Ogawa, K., & Nikai, T. (2004). Elastase and elastase inhibitor from Aspergillus fumigatus, Aspergillus flavus and Aspergillus niger.. Journal of medical microbiology, 53 Pt 5, 351-4 .
최민서(choiminseou) 16:45
Elastase를 1U/mL in 0.1M Tris buffer(pH 8.0)로 만드려고 합니다.
4.0 units/mg protein
3.09 ml: 9.3 units/mg protein: 8.1 mg protein(Biuret)
이라고 적혀있어서 계산을 어떻게 해야될지 잘 모르겠습니다.
Elastase 몇 mg과 0.1M Tris buffer(pH 8.0) 몇 mL를 넣으면 1U/mL in 0.1M Tris buffer(pH 8.0)이 만들어지나요?