2024-11-15
org.kosen.entty.User@e67e0df
익명
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DNA에서 제가 보고자하는 부위를 PCR하기 위해 primer를 디자인하고 PCR 후 전기영동으로 원하는 size에
깔끔하게 one band가 뜬 것을 확인한 후 다음 과정을 진행했습니다.
1. PCR product를 enzyme cut 후 전기영동을 했는데 cut이 되긴 했지만 target band보다 더 큰 size의 band가 나옴
2. PCR product에서 Taq polymerase를 제거하기 위해 Gel elution 혹은 PCR purification 진행.
3. Gel elution 혹은 PCR purification 후 얻은 PCR product의 절반을 enzyme cut 진행
4. Enzyme cut하지 않은 절반과 cut한 절반을 동시에 전기영동으로 확인
5. Cut하지 않은 band는 깔끔하게 target size에 one band가 나왔으나,
cut을 한 sample에선 여전히 target band보다 더 큰 size의 band가 나옴.
차라리 PCR을 한 후 확인했을 때 더 큰 size에 band가 나오면 모르겠는데
항상 PCR은 깔끔한데 enzyme cut하고 난 후에 잡밴드가 나옵니다. 그것도 작은 size면 모르겠는데 더 큰 size에서요
Taq을 없애도 결과가 같으니 도저히 뭐가 문제인지 모르겠습니다.
Restriction eznyme은 MvaI을 사용하는데, 제가 놓친 부분이 있을까요?
- enzyme cut
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