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지식나눔

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western blotting에 관여하여 항체들이 어떻게 처리됩니까?

2005-01-07 org.kosen.entty.User@30718b4 신연남(yannan1016)
  • 1
western blotting에 관여하여 항체들이 어떻게 처리됩니까?
  • western blotting
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답변 1
  • 답변

    김동욱님의 답변

    2005-01-10
    • 0
    질문내용이 명확하지않으나 답변드립니다. western blotting(WB)은 1. SDS-PAGE GEL로 단백질의 크기에따라분리 2. Nitro cellurose membrane로 옮긴(blotting)다. 이것을 3. 1X TTBS(10xTTBS: 24.2 g Tris, 87.66 g NaCl, 2 g NaN3, 5 ml TWEEN 20, per liter. pH to 7.5 )에 10분처리한다. 4. 이때 Nitro cellurose membrane을 5% BSA/TTBS나 탈지분유로 처리하여 primary antibody의 비특이적 반응(Non-specific binding)을 막아주어야한다. 실온에서 30분-1시간 처리. 3. 분리된 항원(자신이 보고자하는 단백질)을 인식하는 항체(이를 1차항체, primary antibody)를 여기에 가한다. 보통 판매하는 primary antibody원액을 1천분에1 정도로 묽혀서 가한다. 하지만 primary antibody에따라 다르니 상품설명서참조. 4. 2시간 실온이나 4'C에서 over night반응.(primary antibody마다 다름) 5. TTBS로 1시간동안 5번-10번 Nitro cellurose membrane를 washing함. 6. primary antibody를 인식하는 enzyme linked 2차항체(enzyme(AP 따위)secondary antibody)를 1:1000 - 1: 10,000 로 가한다.(파는 2차항체마다 다름) 7. 1시간반응후 TTNS로 1시간에걸쳐 5번-10번 정도 washing함. 8. ECL 같은 방법으로 film에 현상시킴.(http://www.amershambiosciences.com) >western blotting에 관여하여 항체들이 어떻게 처리됩니까? >western blotting에 관여하여 항체들이 어떻게 처리됩니까?
    답변수정
    질문내용이 명확하지않으나 답변드립니다. western blotting(WB)은 1. SDS-PAGE GEL로 단백질의 크기에따라분리 2. Nitro cellurose membrane로 옮긴(blotting)다. 이것을 3. 1X TTBS(10xTTBS: 24.2 g Tris, 87.66 g NaCl, 2 g NaN3, 5 ml TWEEN 20, per liter. pH to 7.5 )에 10분처리한다. 4. 이때 Nitro cellurose membrane을 5% BSA/TTBS나 탈지분유로 처리하여 primary antibody의 비특이적 반응(Non-specific binding)을 막아주어야한다. 실온에서 30분-1시간 처리. 3. 분리된 항원(자신이 보고자하는 단백질)을 인식하는 항체(이를 1차항체, primary antibody)를 여기에 가한다. 보통 판매하는 primary antibody원액을 1천분에1 정도로 묽혀서 가한다. 하지만 primary antibody에따라 다르니 상품설명서참조. 4. 2시간 실온이나 4'C에서 over night반응.(primary antibody마다 다름) 5. TTBS로 1시간동안 5번-10번 Nitro cellurose membrane를 washing함. 6. primary antibody를 인식하는 enzyme linked 2차항체(enzyme(AP 따위)secondary antibody)를 1:1000 - 1: 10,000 로 가한다.(파는 2차항체마다 다름) 7. 1시간반응후 TTNS로 1시간에걸쳐 5번-10번 정도 washing함. 8. ECL 같은 방법으로 film에 현상시킴.(http://www.amershambiosciences.com) >western blotting에 관여하여 항체들이 어떻게 처리됩니까? >western blotting에 관여하여 항체들이 어떻게 처리됩니까?
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