2005-05-09
org.kosen.entty.User@48132d4d
김하정(hjdogdo)
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chloroform의 역할은 무엇인가요?
즉 왜 phenol만 쓰지 않고 chloroform과 isoamylalchohol을 같이 쓰나요?
- chloroform
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답변 1
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답변
전주홍님의 답변
2005-05-09- 0
여러 얘기들이 가장 많이 난무하고 있는 분야 중의 하나가 DNA work에 사용되는 reagent에 대한 배경인 것 같습니다. Method in Enzymology 152의 내용을 근거해서 요약하면, phenol의 nucleic acid extraction의 효율성을 높이기 위해 chloroform을 사용합니다. 기본적으로 chloroform은 protein을 denaturation을 시켜 nucleic acid에 결합된 단백질을 효과적으로 제거합니다. Phenol의 능력과 중복되는 측면이 있지만 무엇보다도 중요한 점은 chloroform은 비중이 높아서 phase-separation이 확실히 된다는 점이죠...DNA work에 사용하는 Tris-saturated phenol (pH 8.0)을 직접 만들어 보면 알겠지만 phenol 층은 Tris로 saturation되고 Tris 층은 phenol로 saturation 됩니다. Phenol의 경우 phase separation이 확실히 일어나지 않기 때문에 aqueous phase에 phenol이 조금씩 오염됩니다. 그렇기 때문에 chloroform을 같이 사용하면 phenol과 같이 phase separation이 확실히 일어납니다. isoamyalcohol은 anti-foamer로 사용합니다. 여기에 덧붙이면 lipid 제거의 효과도 물론 있습니다. DNA work에는 주로 pH 8.0의 시약들이 많이 사용되는데 이는 DNA가 pH 8.0에서 가장 안정하기 때문입니다. 이 조건에서 deamidation이 잘 일어나지 않는 것으로 알려져 있습니다. >chloroform의 역할은 무엇인가요? > >즉 왜 phenol만 쓰지 않고 chloroform과 isoamylalchohol을 같이 쓰나요?