2005-11-28
org.kosen.entty.User@1423cda1
김현령(isabelle)
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안녕하세요...
오직 믿고 의지하는것은 코센뿐이니 전문가님들이 조언을 살짝 부탁드립니다.
다름이 아니라, 제가 cell에 endocytosis inhibitor들을 처리한후
저의 chemical들의 uptake를 보려고 하는데요.
문헌들을 찾아보니까 inhibitor를 preincubation한 후에 .....라고 되어있습니다....
저의 질문은요....Preincubation한후에 PBS로 washing을 3번정도 해야되는지 아니면 그냥 preincubation한후에 excess만 버린후에 바로 저의 chemical을 쳐야 하는지 궁금합니다...
그럼 답변부탁드립니다.
안녕히계세요
- inhibitor 처리
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
답변 2
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답변
최양애님의 답변
2005-11-29- 0
Preincubation 용액이 PBS인가요? 그렇다면 PBS로 washing을 하겠지만... 익히 아시겠지만 실험의 모든 단계는 이유가 있는 법, 그러니 그 이유를 잘 이해하시고 해야하겠지요. 다음은 기본이 되는 사항입니다. -Preincubation(전처리) 단계는 처리하고자하는 물질을 제외하고는 모든 것이 처리 조건과 동일한 것이 일반적임. - 처리하고자하는 inhibitor혹은 처리하고자하는 물질은 전처리 용액에 녹아있는 상태가 보통인데, 그 물질의 특성을 고려함. >안녕하세요... > >오직 믿고 의지하는것은 코센뿐이니 전문가님들이 조언을 살짝 부탁드립니다. >다름이 아니라, 제가 cell에 endocytosis inhibitor들을 처리한후 > >저의 chemical들의 uptake를 보려고 하는데요. > >문헌들을 찾아보니까 inhibitor를 preincubation한 후에 .....라고 되어있습니다.... > >저의 질문은요....Preincubation한후에 PBS로 washing을 3번정도 해야되는지 아니면 그냥 preincubation한후에 excess만 버린후에 바로 저의 chemical을 쳐야 하는지 궁금합니다... > >그럼 답변부탁드립니다. > >안녕히계세요 -
답변
전주홍님의 답변
2005-11-29- 0
일단 응용의 측면에서 살펴보면 실험모델에서 inhibitor의 pre-incubation은 결국 preventive effect를 반영하는 것이 되고 post-incubation은 therapeutic effect를 반영하게 됩니다. Inhibitor의 특성이 어떠한지도 중요하게 고려해야 할 문제인데요... 가역적 억제제냐 비가역적 억제제냐의 문제도 한번 생각해 보셔야 할 것 같습니다. 가역적 억제제라면 drug-molecule interaction이 해리상수의 지배를 받을 것이고 비가역적 억제제라면 속도상수의 지배를 받겠죠... 물론 잘 알려진 probe를 이용하여 억제제의 농도와 처리시간을 최적화시키는 작업이 중요합니다. 또한 chemical의 처리시간과 농도 및 안정성 등이 문제가 될텐데요...가역적 억제제라면 버리거나 washing을 한다면 해리상수에 따라 시간이 지나면서 억제 효과가 감소할 수 있겠죠...물론 억제제의 안정성도 중요한 문제입니다. 만약 inhibitor-chemical의 interaction이 일어나지 않는다면 굳이 그냥 버리거나 washing을 할 이유가 있을까 하는 생각도 듭니다 (물론 inhibitor와 chemical이 녹아있는 용매가 같을 경우이겠죠). 만약 interaction이 일어난다면 잘 washing해서 inhibitor를 완전히 제거해 주어야겠지만 실험적으로 앞서 말한 내용들을 한번쯤 고려하셔야 되지 않을까라는 생각이 듭니다. 물론 chemical의 특성이나 측정장비에 따라(예를 들면 형광의 real-time monitoring) 큰 문제가 되지 않을 수도 있겠죠... >안녕하세요... > >오직 믿고 의지하는것은 코센뿐이니 전문가님들이 조언을 살짝 부탁드립니다. >다름이 아니라, 제가 cell에 endocytosis inhibitor들을 처리한후 > >저의 chemical들의 uptake를 보려고 하는데요. > >문헌들을 찾아보니까 inhibitor를 preincubation한 후에 .....라고 되어있습니다.... > >저의 질문은요....Preincubation한후에 PBS로 washing을 3번정도 해야되는지 아니면 그냥 preincubation한후에 excess만 버린후에 바로 저의 chemical을 쳐야 하는지 궁금합니다... > >그럼 답변부탁드립니다. > >안녕히계세요