2006-03-27
org.kosen.entty.User@239d4691
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Enumeration of Ab-forming cells (AFCs)
The spleens were removed aseptically and single cell suspensions were prepared, as described elsewhere . For isolation of mononuclear cells from nasal passages (NPs) and iLP(intestinal lamina propria), a modified dissociation method was used. This method was based upon a previously described protocol using collagenase type IV (0.5 mg/ml; Sigma-Aldrich) enzymatic dissociation to obtain single cell preparations. Mononuclear cells were purified using a discontinuous Percoll gradient (Pharmacia Fine Chemicals). Mononuclear cells at the interface between the 40 and 75% layers were removed, washed, and resuspended in RPMI 1640 (Mediatech) supplemented with HEPES buffer (15 mM), L-glutamine (2 mM), penicillin (100 U/ml), streptomycin (100 µg/ml), and 10% FCS (complete medium). An ELISPOT assay was used to detect cells producing IgG and IgA Abs . Ninety-six-well nitrocellulose plates (Millititer HA; Millipore) were coated with 10 µg/ml BoNT/A for analysis of anti-BoNT/A-specific AFCs.
이런 내용에 익숙하지 않아서 그런지 실험방법이 머리속으로 그려지지가 않습니다...
쉽게 설명좀 부탁드립니다...
- antibody
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배우철님의 답변
2006-03-27- 0
The Journal of Immunology, 2003, 170: 1754-1762. Protective Mucosal Immunity in Aging Is Associated with Functional CD4+ T Cells in Nasopharyngeal-Associated Lymphoreticular Tissue 1 이 논문의 내용을 참조한 것이군요...결국 전체 mononuclear cell에서 항체를 만드는 B세포를 계수했다는 의미입니다..반면에 T세포는 구체적으로 분리해서 더 혼동하게 만들었습니다.. 질문하신 분이나 저나 mononuclear cell = monocyte 또는 macrophage를 염두에 두고 있었습니다..그렇지만 B세포도 mononuclear cell의 범주에 들어갑니다.. 사람의 면역계는 단핵 세포(mononuclear cell)와 다형핵 세포로(polymorphonuclear cell)로 구성되어 있습니다.. 그 중에서 단핵 세포 ; 림프구와 단구(monocyte)이고 다형핵 세포 ; 호중구(neutrophil), 호염구(basophil), 호산구(eosinophil) 입니다. 다시 세분화하여 단핵세포인 림프구에서 대표적인 세포들이 B 세포, T 세포, NK 세포가 있는 것입니다... Percoll gradient 를 이용하여 결국 단핵세포 중에서 B세포가 많이 있는 40-75% 분획을 취해서 시험했다는 의미입니다... 다른 논문들에서는 mononuclear cell이라고 하지 않고... lymphocyte라는 표현을 쓰더군요...