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아래의 바이러스에 대한 간접시험은 한국화학연구원이나 생명공학연구원을 포함하여 여러 곳에서 해주고 있습니다. 항 CMV 약효검색 Screening Method : 항 CMV 약효검색 (In vivo Test) : 세포배양체계 약효검색 효능검색소요기간 : 30일 효능검색소요비용 : 10만원 시험물질소요량 : 3mg 항 CMV 약효검색 (세포배양체계 약효검색: CPE 저해법) 1. 시험 원리 세포의 CPE변화 측정 2. 검색 능력 Multi-Screen System: 96 well plate format 3. 재료 및 장비 HEL세포, HCMV, DME/2% FBS, Giemsa용액, FDA, propidium idode, CO2 배양기, Fluorescence microplate reader, 현미경 등 4. 시험 방법 일차 항바이러스약효 검색으로서 바이러스에 감염된 HEL세포의 CPE저해정도를 Giemsa염색법으로 조사한다. 시험바이러스는 CMV strain AD-169와 Davis를 이용한다. 성장이 멈춘 HEL 299세포에 희석된 바이러스를 96-well plate의 well당 2∼4 CCID50가 되도록 100 ㎕씩 접종시키고 두 시간동안 37 ℃ CO2 배양기에서 흡착시킨다. 바이러스액을 제거하고 HSV에서와 같이 약물을 100 ㎕씩 duplicate로 첨가한 후 일주일동안 배양한다. 배양액을 제거한 후 세포를 고정시키고 Giemsa 염색액으로 세포를 염색한 후 현미경으로관찰하여 50%의 세포가 바이러스에 의한 CPE를 나타내지 않도록 한 약물의 농도를 EC50로 산출한다. 5. 평가 기준 각 농도에서의 약효 및 독성치 비교 및 selectivity index 값. 표준 약물과도 비교 6. 참고 자료 1) Lee C-K, Rha ZS, Kim HS: In vitro evaluation of anti-herpesviral activity of derivatives fo nucleic acids and their precursors. J Korean Soc Virol 22: 69-76, 1992 항 HIV 약효검색 항 HSV 약효검색 항 RNA Virus 약효검색 Screening Method : CPE 저해법 (In vitro Test) : 세포배양체계 약효검색 - 항 RNA 약효검색 효능검색소요기간 : 10일 효능검색소요비용 : 10만원 시험물질소요량 : 3mg -------------------------------------------------------------------------------- CPE 저해법 (세포배양체계 약효검색 : 항 RNA 약효검색) 1. 시험 원리 세포의 CPE변화 측정 2. 검색 능력 Multi-Screen System: 96 well plate format 3. 재료 및 장비 HeLa세포, PV-1, CoxB3, VSV, DME/2% FBS, MTT, CO2 배양기, Microplate reader 등 4. 시험 방법 일차 검색으로서 바이러스에 감염된 HeLa세포의 CPE저해정도를 MTT검색법으로 조사한다. 시험바이러스는 poliovirus type 1 (PV-1) strain Brunhilde, coxsackie B virus type 3 (CoxB3) strain Nancy, vesicular stomatitis virus (VSV) strain Indiana이다. 접종량이 100 CCID50로 희석된 바이러스를 96-well plate의 HeLa세포에 앞에 기술한 항HSV 약효검색법과 같이 시행하는데, 2 일간 배양한 다음 약효를 판정한다. 5. 평가 기준 각 농도에서의 약효 및 독성치 비교 및 selectivity index 값. 표준 약물과도 비교 6. 참고 자료 1) Lee C-K, Rha ZS, Kim HS: In vitro evaluation of anti-herpesviral activity of derivatives fo nucleic acids and their precursors. J Korean Soc Virol 22: 69-76, 1992 항 VZV 약효검색 Screening Method : 항 VZV 약효검색 (In vitro Test) : 세포배양체계 약효검색 효능검색소요기간 : 30일 효능검색소요비용 : 10만원 시험물질소요량 : 3mg -------------------------------------------------------------------------------- 항 VZV 약효검색 (세포배양체계 약효검색: plaque assay) 1. 시험 원리 세포단층에 형성된 plqauq 수 감소 측정 2. 검색 능력 Multi-Screen System: 96 well plate format 3. 재료 및 장비 HEL세포, VZV, DME/2% FBS, Giemsa용액, CO2 배양기, 현미경 등 4. 시험 방법 일차 항바이러스약효 검색으로서 바이러스에 감염된 HEL세포의 CPE저해정도를 Giemsa염색법으로 조사한다. 시험바이러스는 CMV strain AD-169와 Davis를 이용한다. 성장이 멈춘 HEL 299세포에 희석된 바이러스를 96-well plate의 well당 2∼4 CCID50가 되도록 100 ㎕씩 접종시키고 두 시간동안 37 ℃ CO2 배양기에서 흡착시킨다. 바이러스액을 제거하고 HSV에서와 같이 약물을 100 ㎕씩 duplicate로 첨가한 후 일주일동안 배양한다. 배양액을 제거한 후 세포를 고정시키고 Giemsa 염색액으로 세포를 염색한 후 현미경으로관찰하여 50%의 세포가 바이러스에 의한 CPE를 나타내지 않도록 한 약물의 농도를 EC50로 산출한다. 5. 평가 기준 각 농도에서의 plaque 수 및 표준 약물과도 비교 6. 참고 자료 1) Lee C-K, Rha ZS, Kim HS: In vitro evaluation of anti-herpesviral activity of derivatives fo nucleic acids and their precursors. J Korean Soc Virol 22: 69-76, 1992 그런데 보다 병원성이 높은 바이러스를 대상으로 직접적인 효과를 확인하려고 하면 외국이나 국내의 특정 기관에 의뢰하셔야 합니다. >국내에 항균, 항곰팡이 테스트를 해주는 곳은 여럿 있는 것으로 아는데, 혹시 국내에 항바이러스 테스트를 해주는 곳이 있는지 알고 싶습니다. 국내에 없다면 해외기관도 괜찮은데 알려주시면 감사하겠습니다.