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지식나눔

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native gel을 거는데 샘플이 내려가지 않고 웰에 걸려있는데 어떻게 해결해야하나요?

2006-06-07 org.kosen.entty.User@6da83ac 서주현(seojoohyun)
  • 1
단백질 정제를 하고 있습니다. 세가지의 컬럼을 걸고 나서 반응성이 있는 fraction을 가지고 native gel을 걸어 밴드를 확인하려고 합니다. 그런데 native gel을 running하고 나면 샘플이 웰에 로딩한 상태로 걸려서 더 이상 내려가지를 않습니다. 3% 젤에서도 샘플이 내려가지 않습니다.... 물론, 몇개의 밴드는 내려가지만 activity가 있는 fraction은 (대부분의 단백질이 있는 밴드) 웰에 걸린 상태로 안내려갑니다. 그래서 activity가 있는 fraction을 잘라서 PAGE젤을 걸어보면 여러 크기의 밴드가 나옵니다. 어떻게 하면 그 밴드를 전개할 수 있을까요....해결책을 가지고 있으신 분 계시면 꼭 답변 부탁드리겠습니다.
  • native gel
  • protein purification
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답변 1
  • 답변

    임신혁님의 답변

    2006-06-08
    • 0
    아마도 운이없게 분리하고있는 단백질의 등전점 (isoelectric point)가 native gel buffer와 같은것 같습니다. 따라서 샘풀의 PH를 변화시겨보는게 좋을 듯 합니다. >단백질 정제를 하고 있습니다. 세가지의 컬럼을 걸고 나서 반응성이 있는 fraction을 가지고 native gel을 걸어 밴드를 확인하려고 합니다. 그런데 native gel을 running하고 나면 샘플이 웰에 로딩한 상태로 걸려서 더 이상 내려가지를 않습니다. 3% 젤에서도 샘플이 내려가지 않습니다.... >물론, 몇개의 밴드는 내려가지만 activity가 있는 fraction은 (대부분의 단백질이 있는 밴드) 웰에 걸린 상태로 안내려갑니다. 그래서 activity가 있는 fraction을 잘라서 PAGE젤을 걸어보면 여러 크기의 밴드가 나옵니다. 어떻게 하면 그 밴드를 전개할 수 있을까요....해결책을 가지고 있으신 분 계시면 꼭 답변 부탁드리겠습니다.
    답변수정
    아마도 운이없게 분리하고있는 단백질의 등전점 (isoelectric point)가 native gel buffer와 같은것 같습니다. 따라서 샘풀의 PH를 변화시겨보는게 좋을 듯 합니다. >단백질 정제를 하고 있습니다. 세가지의 컬럼을 걸고 나서 반응성이 있는 fraction을 가지고 native gel을 걸어 밴드를 확인하려고 합니다. 그런데 native gel을 running하고 나면 샘플이 웰에 로딩한 상태로 걸려서 더 이상 내려가지를 않습니다. 3% 젤에서도 샘플이 내려가지 않습니다.... >물론, 몇개의 밴드는 내려가지만 activity가 있는 fraction은 (대부분의 단백질이 있는 밴드) 웰에 걸린 상태로 안내려갑니다. 그래서 activity가 있는 fraction을 잘라서 PAGE젤을 걸어보면 여러 크기의 밴드가 나옵니다. 어떻게 하면 그 밴드를 전개할 수 있을까요....해결책을 가지고 있으신 분 계시면 꼭 답변 부탁드리겠습니다.
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