2006-10-13
org.kosen.entty.User@25bfd932
김영철(mal663)
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안녕하세요~
skeletal muscle 관련 실험중 도움을 청할 곳이 없어 이렇게 질문을 드리게 되었습니다.
잦은 질문에도 정성스러운 답변 주셔서 감사합니다.
저는 skeletal muscle을 이용하여 protein lysate를 뽑아 western을 진행하고 있습니다.
그런데... band 끌림이 심하고 non-specific 한 band가 많이 떠서 고민입니다.
sample은 rat에서 추출하였고... ab는 anti-r 이고 rat에 cross-reactivity를 가지고 있다고 하는 것을 사용하고 있습니다.
sample을 loading 후 secondary only specific band를 확인한 결과 나오지 않았습니다.
그런데...
실험진행중 다른 sample과 비교해 다른점이 "sample+sample buffer"에 열을 가해줄때...
100도씨 10분을 가했더니... skeletal muscle 응고 덩어리가 살짝 생겼습니다.
만약 이것이 문제라면~ tissue별 denature 온도와 시간의 적정선이 있는지 알고싶습니다.
작은 도움이라도 주신다면 감사한 마음으로 실험에 임하겠습니다
- muscle
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 1
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답변
홍동호님의 답변
2006-10-13- 0
>안녕하세요~ > >skeletal muscle 관련 실험중 도움을 청할 곳이 없어 이렇게 질문을 드리게 되었습니다. > >잦은 질문에도 정성스러운 답변 주셔서 감사합니다. > >저는 skeletal muscle을 이용하여 protein lysate를 뽑아 western을 진행하고 있습니다. > >그런데... band 끌림이 심하고 non-specific 한 band가 많이 떠서 고민입니다. > >sample은 rat에서 추출하였고... ab는 anti-r 이고 rat에 cross-reactivity를 가지고 있다고 하는 것을 사용하고 있습니다. > >sample을 loading 후 secondary only specific band를 확인한 결과 나오지 않았습니다. > >그런데... > >실험진행중 다른 sample과 비교해 다른점이 “sample+sample buffer“에 열을 가해줄때... > >100도씨 10분을 가했더니... skeletal muscle 응고 덩어리가 살짝 생겼습니다. > >만약 이것이 문제라면~ tissue별 denature 온도와 시간의 적정선이 있는지 알고싶습니다. > >작은 도움이라도 주신다면 감사한 마음으로 실험에 임하겠습니다 원문이 없어 사이트 주소를 올립니다. 좋은 연구 되세요 http://diabetes.diabetesjournals.org/cgi/content/full/55/7/2059 >