2007-01-05
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정유선(sunyjjung)
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IL-2의 발현을 볼려고 합니다. ELISA 를 사용할껀데요 근데 궁금한것은. 제가 마우스 spleen cell을 이용하고자 하는데 처음 시작할때 spleen cell 자체를 분리하여 사용하는지 아님 spleen cell 내의 T cell을 따로 분리하여 처리하여야 하는지 궁금 합니다. (제가 잘못 이해하는지 각 protocol에는 이런것들을 처리한다는 표현은 없더군요 ) 만약 처리 한다면 어느정도의 양을 처리하여야 하는지 또한 제 시료를 ELISA assy들어 가기전에 처리해주어야 하는지 아님 들어가고 나서 처리해야 하는지 알고 싶습니다.
처음 실험하는거라 통 감이 없네요..무지한 학생올림..
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답변
윤철희님의 답변
2007-01-05- 0
>IL-2의 발현을 볼려고 합니다. ELISA 를 사용할껀데요 근데 궁금한것은. 제가 마우스 spleen cell을 이용하고자 하는데 처음 시작할때 spleen cell 자체를 분리하여 사용하는지 아님 spleen cell 내의 T cell을 따로 분리하여 처리하여야 하는지 궁금 합니다. (제가 잘못 이해하는지 각 protocol에는 이런것들을 처리한다는 표현은 없더군요 ) 만약 처리 한다면 어느정도의 양을 처리하여야 하는지 또한 제 시료를 ELISA assy들어 가기전에 처리해주어야 하는지 아님 들어가고 나서 처리해야 하는지 알고 싶습니다. > > >처음 실험하는거라 통 감이 없네요..무지한 학생올림.. 2가지로 나누어서 생각하면 편할 것 같습니다.. 자세한 설명이 없어서 모르겠지만 일단 Th 세포의 활성을 보고자 하는 것인 듯 한데요.. 첫째는 실험 디자인 입니다. T 세포를 분리하거나 분리하지 않거나 하는것은 어떤 상황을 설정하느냐는 것이죠.. 즉 특정 mitogen and/or immune suppressor를 사용하여 T 세포에 직접적인 반응을 보고 싶다면 먼저 분리를 하고 여러가지 방법으로 대조구 및 처리구를 만든 다음 일정 기간 (보통 48-72 시간) 배양을 하면 되구요.. 아니면 APC(항원제시세포)에 의한 T 세포의 활성을 보는 것이라면 당연히 APC가 같이 있어야 하겠지요.. 물론 처리를 APC에 먼저 할 것이냐 아니냐는 역시 실험자가 판단할 일이구요.. 둘째는 위의 방법에 의해서 수거 된 배양액(72시간이더라도 48시간의 배양액을 일부 수거할 수 있음)을 가지고 kit에서 지시하는데로 ELISA를 수행하여 standard 대비 IL-2의 양을 구하면 됩니다.. 좋은 실험되세요..