2007-02-25
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최순범(beom8649)
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발효기를 사용하여 유전자 조작된 E. coli를 배양 시키려고 합니다.
발효기 사용은 해봤지만 몇가지 의문점이 들어 질문을 남깁니다.
1. 항생제(ampicilin)는 언제 첨가를 하며, 항생제의 멸균은 어떻게 하나요?
2. 소포제의 멸균은 어떻게 하나요? auto-clave로 돌리나요?
3. 질산, NaOH와 같은 pH 조절 용액의 멸균 어떻게 하죠?
감사합니다.
- fermentor
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 3
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답변
김용석님의 답변
2007-02-28- 0
저는 균사체를 주로 배양하기 때문에 약간 다를 수 있으나 제가 아는 것에 대해서 알려 드리겠습니다. 1. 항생제, ampicilin을 쓰신다고 하셨는데 제가 알기론 ampicilin이 불활성화 되는 온도는 꽤 높은 것으로 알고 있습니다. auto-clave을 해도 무방하다고 생각됩니다만, 불안하시다면 filter 멸균을 하신 후 멸균 완료된 발효기에 첨가하시면 될 것 같습니다. 2. 소포제 멸균은 저희는 발효기를 auto-clave할 때 같이합니다. 다만 소포제병과 발효기 본체에 연결된 관이 압력에 못 견디고 터지는 수가 있으니 주의하시길 바랍니다. 3. pH 조절 용액에 대해선 저도 잘 모르겠군요...^^; >발효기를 사용하여 유전자 조작된 E. coli를 배양 시키려고 합니다. >발효기 사용은 해봤지만 몇가지 의문점이 들어 질문을 남깁니다. > >1. 항생제(ampicilin)는 언제 첨가를 하며, 항생제의 멸균은 어떻게 하나요? >2. 소포제의 멸균은 어떻게 하나요? auto-clave로 돌리나요? >3. 질산, NaOH와 같은 pH 조절 용액의 멸균 어떻게 하죠? > > >감사합니다. -
답변
김중재님의 답변
2007-03-01- 0
1. 항생제(ampicilin)는 언제 첨가를 하며, 항생제의 멸균은 어떻게 하나요? 앞서 답변하신 분이 말씀하신 것처럼, 멸균된 배지가 식으면 filter 된 ampicilin 을 첨가하였습니다. 2. 소포제의 멸균은 어떻게 하나요? auto-clave로 돌리나요? 소포제는 적절히 희석하여 autoclave 하였습니다. 3. 질산, NaOH와 같은 pH 조절 용액의 멸균 어떻게 하죠? pH 조절 용액도 autoclave 하였습니다. 각각의 병들을 발효기에 연결된 상태로 멸균할 때는 증기가 빠져나갈 수 있도록 뚜껑을 완전히 받지 않은 상태로 멸균하면 압력에 의한 파손은 걱정하지 않아도 될 것입니다. -
답변
이홍섭님의 답변
2007-03-06- 0
1. 항생제(ampicilin)는 언제 첨가를 하며, 항생제의 멸균은 어떻게 하나요? 대장균의 경우 2-3시간 배양 할거라면 극단적으로 물로 행구고도 사용합니다...실지로 그리 사용 중입니다... 이건 모 응용이구요 원칙적으로 모든 항생제는 멸균 후 50도 이하에서 접종전에 첨가 합니다...물론 따로 녹여서 필터링 하거나 알콜에 녹이는 경우 그냥 사용합니다. 2. 소포제의 멸균은 어떻게 하나요? auto-clave로 돌리나요? 소포제는 사용에 신중해야 합니다..세포 표면에 달라 붙어 나중에 이게 문제가 될수도 있습니다. 방선균의 경우 적당량 먼저 넣고 멸균 합니다..그래야 오바이트하지 않습니다. 여기서 적당량..어려운데 보통 수용성 소포제라 명명된 실리콘계 소포제의 경우 1/4 희석액을 1ml/L 정도 넣습니다. 그리고 희석액을 따로 멸균해서 오토포밀 센서의 라인에 연결합니다. 3. 질산, NaOH와 같은 pH 조절 용액의 멸균 어떻게 하죠? 질산 염산 강산이나 강알카리는 멸균 하지 않습니다. 그냥 사용하는 것이 원칙입니다...단!!! 희석해서 사용 ~~~