지식나눔

western blot에 관한 질문입니다.

running gel 혹은 stacking gel 같은 경우 또는 running buffer의 경우 제가 알아보려고 하는 단백질에 따라서 달리 쓰이나요? 제가 예전에 할때 buffer는 한개만 정해서 그걸로 계속 사용했던걸로 아는데 내가 알아보려고 하는 단백질에 따라 기존의 알고 있는 protocol에서 좀 다르게 해야될 부분이 있는지 알고 싶습니다. 자세한 조언 부탁드립니다.
  • western
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    이유진님의 답변

    > running gel 혹은 stacking gel 같은 경우 > 또는 running buffer의 경우 제가 알아보려고 하는 단백질에 따라서 달리 쓰이나요? > > 제가 예전에 할때 buffer는 한개만 정해서 > 그걸로 계속 사용했던걸로 아는데 > > 내가 알아보려고 하는 단백질에 따라 > 기존의 알고 있는 protocol에서 좀 다르게 해야될 > 부분이 있는지 알고 싶습니다. > > 자세한 조언 부탁드립니다. 보통 단백질의 분자량에 따라 gel %가 달라지니까 알아볼려고 하는 단백질의 분자량을 우선 체크해 보시고, 분자량이 커짐에 따라 %를 높이면 될 것이고, buffer는 바꾸지 않아도 될것 같은데요..
    > running gel 혹은 stacking gel 같은 경우 > 또는 running buffer의 경우 제가 알아보려고 하는 단백질에 따라서 달리 쓰이나요? > > 제가 예전에 할때 buffer는 한개만 정해서 > 그걸로 계속 사용했던걸로 아는데 > > 내가 알아보려고 하는 단백질에 따라 > 기존의 알고 있는 protocol에서 좀 다르게 해야될 > 부분이 있는지 알고 싶습니다. > > 자세한 조언 부탁드립니다. 보통 단백질의 분자량에 따라 gel %가 달라지니까 알아볼려고 하는 단백질의 분자량을 우선 체크해 보시고, 분자량이 커짐에 따라 %를 높이면 될 것이고, buffer는 바꾸지 않아도 될것 같은데요..
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    박재봉님의 답변

    > running gel 혹은 stacking gel 같은 경우 > 또는 running buffer의 경우 제가 알아보려고 하는 단백질에 따라서 달리 쓰이나요? > > 제가 예전에 할때 buffer는 한개만 정해서 > 그걸로 계속 사용했던걸로 아는데 > > 내가 알아보려고 하는 단백질에 따라 > 기존의 알고 있는 protocol에서 좀 다르게 해야될 > 부분이 있는지 알고 싶습니다. > > 자세한 조언 부탁드립니다. 보통 단백질 전기영동 할 때에 SDS-PAGE를 쓰는 데 이것은 SDS를 사용합니다. 단백질의 분자량에 따른 위치를 알 수 있습니다. 그러므로 SDS가 끌려가는 조건의 완충액을 사용합니다. 다른 완충액은 필요가 없을 것 같습니다. 단 SDS-PAGE 가 아닌 그냥 PAGE를 한다면 완충액의 pH를 한번 더 고려 해봐야 할 것 같습니다.
    > running gel 혹은 stacking gel 같은 경우 > 또는 running buffer의 경우 제가 알아보려고 하는 단백질에 따라서 달리 쓰이나요? > > 제가 예전에 할때 buffer는 한개만 정해서 > 그걸로 계속 사용했던걸로 아는데 > > 내가 알아보려고 하는 단백질에 따라 > 기존의 알고 있는 protocol에서 좀 다르게 해야될 > 부분이 있는지 알고 싶습니다. > > 자세한 조언 부탁드립니다. 보통 단백질 전기영동 할 때에 SDS-PAGE를 쓰는 데 이것은 SDS를 사용합니다. 단백질의 분자량에 따른 위치를 알 수 있습니다. 그러므로 SDS가 끌려가는 조건의 완충액을 사용합니다. 다른 완충액은 필요가 없을 것 같습니다. 단 SDS-PAGE 가 아닌 그냥 PAGE를 한다면 완충액의 pH를 한번 더 고려 해봐야 할 것 같습니다.
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