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Enzyme kinetics 분석에 photobleaching이 미치는 영향

안녕하십니까? Fluorescent resorufin를 최종 산물 중의 하나로 생산하는 효소의 동력학분석을 하고 있습니다. 동력학 분석을 위해 형광 분석기로 20회의 fluorescence intensity를 측정했으며, resorufin의 photobleaching에 의해 야기되는 측정 당 intensity loss rate 를 결정한 상태입니다. 최대한 정확한 kinetic paramater의 결정을 위해서 구해진 intensity loss rate로 산물의 fluorescence intensity를 보정(compensation) 하고자 합니다. Confocal image의 intensity compensation 방법과는 다르게, 효소 동력학의 경우, photobeaching에 의한 형광강도의 감소 및 산물의 생성에 의한 형광 강도의 증가가 동시에 일어나기 때문에 이러한 상황에 맞는 보정 방법을 찾아야할 것 같은데 적당한 참고문헌이나 방법을 찾을 수가 없어서 도움을 요청합니다. 감사합니다.
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    이상후님의 답변

    >안녕하십니까? > >Fluorescent resorufin를 최종 산물 중의 하나로 생산하는 효소의 동력학분석을 하고 있습니다. 동력학 분석을 위해 형광 분석기로 20회의 fluorescence intensity를 측정했으며, resorufin의 photobleaching에 의해 야기되는 측정 당 intensity loss rate 를 결정한 상태입니다. >최대한 정확한 kinetic paramater의 결정을 위해서 구해진 intensity loss rate로 산물의 fluorescence intensity를 보정(compensation) 하고자 합니다. Confocal image의 intensity compensation 방법과는 다르게, 효소 동력학의 경우, photobeaching에 의한 형광강도의 감소 및 산물의 생성에 의한 형광 강도의 증가가 동시에 일어나기 때문에 이러한 상황에 맞는 보정 방법을 찾아야할 것 같은데 적당한 참고문헌이나 방법을 찾을 수가 없어서 도움을 요청합니다. > >감사합니다. > Fluorescent resorufin과 직접 관련되지는 않지만 실험방법론적으로 비슷한 레퍼런스이니 참고하시기 바랍니다. Photochemistry and Photobiology 81 (2) 358-366 (2005) J. Biol. Chem., 281 (52), 40049-40056 (2006) Rapid Kinetics of Na+ Binding to Thrombin
    >안녕하십니까? > >Fluorescent resorufin를 최종 산물 중의 하나로 생산하는 효소의 동력학분석을 하고 있습니다. 동력학 분석을 위해 형광 분석기로 20회의 fluorescence intensity를 측정했으며, resorufin의 photobleaching에 의해 야기되는 측정 당 intensity loss rate 를 결정한 상태입니다. >최대한 정확한 kinetic paramater의 결정을 위해서 구해진 intensity loss rate로 산물의 fluorescence intensity를 보정(compensation) 하고자 합니다. Confocal image의 intensity compensation 방법과는 다르게, 효소 동력학의 경우, photobeaching에 의한 형광강도의 감소 및 산물의 생성에 의한 형광 강도의 증가가 동시에 일어나기 때문에 이러한 상황에 맞는 보정 방법을 찾아야할 것 같은데 적당한 참고문헌이나 방법을 찾을 수가 없어서 도움을 요청합니다. > >감사합니다. > Fluorescent resorufin과 직접 관련되지는 않지만 실험방법론적으로 비슷한 레퍼런스이니 참고하시기 바랍니다. Photochemistry and Photobiology 81 (2) 358-366 (2005) J. Biol. Chem., 281 (52), 40049-40056 (2006) Rapid Kinetics of Na+ Binding to Thrombin
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    안길홍님의 답변

    >안녕하십니까? >>Fluorescent resorufin를 최종 산물 중의 하나로 생산하는 효소의 동력학분석을 하고 있습니다. 동력학 분석을 위해 형광 분석기로 20회의 fluorescence intensity를 측정했으며, resorufin의 photobleaching에 의해 야기되는 측정 당 intensity loss rate 를 결정한 상태입니다. >최대한 정확한 kinetic paramater의 결정을 위해서 구해진 intensity loss rate로 산물의 fluorescence intensity를 보정(compensation) 하고자 합니다. Confocal image의 intensity compensation 방법과는 다르게, 효소 동력학의 경우, photobeaching에 의한 형광강도의 감소 및 산물의 생성에 의한 형광 강도의 증가가 동시에 일어나기 때문에 이러한 상황에 맞는 보정 방법을 찾아야할 것 같은데 적당한 참고문헌이나 방법을 찾을 수가 없어서 도움을 요청합니다.>>감사합니다. 첨부자료
    >안녕하십니까? >>Fluorescent resorufin를 최종 산물 중의 하나로 생산하는 효소의 동력학분석을 하고 있습니다. 동력학 분석을 위해 형광 분석기로 20회의 fluorescence intensity를 측정했으며, resorufin의 photobleaching에 의해 야기되는 측정 당 intensity loss rate 를 결정한 상태입니다. >최대한 정확한 kinetic paramater의 결정을 위해서 구해진 intensity loss rate로 산물의 fluorescence intensity를 보정(compensation) 하고자 합니다. Confocal image의 intensity compensation 방법과는 다르게, 효소 동력학의 경우, photobeaching에 의한 형광강도의 감소 및 산물의 생성에 의한 형광 강도의 증가가 동시에 일어나기 때문에 이러한 상황에 맞는 보정 방법을 찾아야할 것 같은데 적당한 참고문헌이나 방법을 찾을 수가 없어서 도움을 요청합니다.>>감사합니다. 첨부자료
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