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지식나눔

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제한효소처리

2008-05-27 org.kosen.entty.User@749eba65
  • 1
이번에 제한효소를 이용해 DNA를 자르는 실험을 하는데.. 제한효소에의해 잘린 밴드가 관찰되지 않았네요... DNA는 92ng/ul의 농도로 5ul넣었고... 제한효소는 BamHI 0.5ul, buffer는 2ul totla volume 20ul로 하였습니다. 반응은 overnight했구요... DNA의 농도가 적아서 그런건지..아니면 다른 이유가 있어서 그런건지 알고 싶습니다...^^
  • Enzyme
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답변 1
  • 답변

    정철웅님의 답변

    2008-05-28
    • 0
    >이번에 제한효소를 이용해 DNA를 자르는 실험을 하는데.. > >제한효소에의해 잘린 밴드가 관찰되지 않았네요... > >DNA는 92ng/ul의 농도로 5ul넣었고... > >제한효소는 BamHI 0.5ul, buffer는 2ul > >totla volume 20ul로 하였습니다. > >반응은 overnight했구요... > >DNA의 농도가 적아서 그런건지..아니면 다른 이유가 있어서 그런건지 > >알고 싶습니다...^^ 주신 정보가 너무 적어서 정확한 답은 드릴 수 없지만 몇가지 검토사항을 알려드리겠습니다.. - 아예 안 잘린 것인지 아니면 잘리긴 했는데 원하는 fragment 가 안보이는 것인지요? - 잘려서 나올 fragment size를 고려했을 때 충분히 관찰 가능한 양의 DNA를 사용 했는지요? - total 450~500 ng의 DNA가 들어 갔는데 0.5 ul 효소로 overnight 하면 star activity에 의해 nonspecific 하게 잘릴 수 있으니 효소를 줄이시던지 시간을 줄여보시기 바랍니다. BSA를 첨가하시는 것도 고려하시기 바랍니다. - 아예 안 잘린 것이면 DNA prep.을 다시 해서 해 보시고 그래도 안 돼면 다른 효소로 enzyme mapping을 해서 원하는 DNA가 맞는지 여부도 확인 해 볼 필요도 있습니다.
    답변수정
    >이번에 제한효소를 이용해 DNA를 자르는 실험을 하는데.. > >제한효소에의해 잘린 밴드가 관찰되지 않았네요... > >DNA는 92ng/ul의 농도로 5ul넣었고... > >제한효소는 BamHI 0.5ul, buffer는 2ul > >totla volume 20ul로 하였습니다. > >반응은 overnight했구요... > >DNA의 농도가 적아서 그런건지..아니면 다른 이유가 있어서 그런건지 > >알고 싶습니다...^^ 주신 정보가 너무 적어서 정확한 답은 드릴 수 없지만 몇가지 검토사항을 알려드리겠습니다.. - 아예 안 잘린 것인지 아니면 잘리긴 했는데 원하는 fragment 가 안보이는 것인지요? - 잘려서 나올 fragment size를 고려했을 때 충분히 관찰 가능한 양의 DNA를 사용 했는지요? - total 450~500 ng의 DNA가 들어 갔는데 0.5 ul 효소로 overnight 하면 star activity에 의해 nonspecific 하게 잘릴 수 있으니 효소를 줄이시던지 시간을 줄여보시기 바랍니다. BSA를 첨가하시는 것도 고려하시기 바랍니다. - 아예 안 잘린 것이면 DNA prep.을 다시 해서 해 보시고 그래도 안 돼면 다른 효소로 enzyme mapping을 해서 원하는 DNA가 맞는지 여부도 확인 해 볼 필요도 있습니다.
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