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답변
장병기님의 답변
2008-07-07- 0
일단 20 mM 이라고 하셨으니, 가지고 계신 hepes 를 20 mM 농도로 만들 최종 부피에 대한 양을 계산하세요. 1리터 기준으로 가지고 있는 시약의 분자량 * 0.02 (만들려는 농도를 M 로 표현) * 1 (1리터를 만든다는 가정하에... 실은 곱해줄 필요성이 없는... 만약 500 ml 을 만든다면 * 0.5, 50 ml 을 만들고 싶으면 * 0.05) = 넣어주어야 할 hepes 의 양 (g) 입니다. saline 이라하믄, 버퍼에 NaCl 과 KCl 이 들어갑니다. 버퍼 만들어 사용하시는 분마다 약간의 농도차가 있습니다. 130-140mM NaCl 과 (보통 NaCl 이 분자량이 대략 60 정도 이므로 60 * 0.135 (135 mM 이라 생각하면) * 1 (1리터 만드신다면) = NaCl 양 (g) 2-4 mM KCl 정도의 농도를 보통 맞춥니다. (위와 마찬가지 계산법으로) 다음으로 원하는 pH 조정을 합니다. hepes 도 산성과 알칼리성 이 있습니다. hepes, acidic 인지 hepes, basic 인지 시약병에서 확인하세요. hepes 가 acidic 한 것이면 pH 맞추기전 pH 가 낮을 겁니다. 따라서 KOH 로 적정해주시고, 반대로 basic 한 것이면 pH 가 높으므로 (중성 기준으로), HCl 로 원하는 pH 까지 적정해줍니다. 중성 pH 6-8 사이를 맞춘다는 가정하에 말씀드리는 겁니다. 보통 NaOH 와 KOH 를 이용하여 pH 를 높이는데 사용하는데 차이점은 크게 없다고 보시면 되지만, 굳이 사용하실 경우 potassium 이 들어간 버퍼는 같은 potassium 이 있는 KOH 를 이용합니다. 이렇게 만드시면 원하시는 버퍼를 만들수 있을거라 생각됩니다. >조성하고 만드는 법 아시는 분은 답변 부탁드립니다.