2008-07-21
org.kosen.entty.User@13714576
김진(jkim01)
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안녕하세요.
Apoptosis 관련 실험을 FACs를 이용해서 진행하고 있는데요.
정상 암세포를 아무것도 처리하지 않은 것, 7-AAD만 처리한 것, FITC-Annexin V만 처리한 것 이렇게 3개로 나누어서 먼저 찍어서 조건을 잡으려고 하는데요.
정상 암세포를 아무것도 처리하지 않은 것, 7-AAD만 처리한 것의 경우는 왼쪽 아래부분에 잘 잡히는데요.
FITC-Annexin V만 처리한 것의 경우에는 이상하게도 FITC-Annexin V positive쪽으로 shift가 됩니다.
처음에는 셀이 이상한가 했서 숫자도 줄여서 찍어보고 했는데 계속 이렇게 shift가 일어납니다.
이유가 뭔지 정말 궁금합니다.
고수님들 답변을 부탁드립니다.
좋은 하루 되세요.
- apoptosis
- FACS
- Annexin V
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 2
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답변
김현선님의 답변
2008-07-21- 0
> 안녕하세요. > > Apoptosis 관련 실험을 FACs를 이용해서 진행하고 있는데요. > > 정상 암세포를 아무것도 처리하지 않은 것, 7-AAD만 처리한 것, FITC-Annexin V만 처리한 것 이렇게 3개로 나누어서 먼저 찍어서 조건을 잡으려고 하는데요. > > 정상 암세포를 아무것도 처리하지 않은 것, 7-AAD만 처리한 것의 경우는 왼쪽 아래부분에 잘 잡히는데요. > > FITC-Annexin V만 처리한 것의 경우에는 이상하게도 FITC-Annexin V positive쪽으로 shift가 됩니다. > > 처음에는 셀이 이상한가 했서 숫자도 줄여서 찍어보고 했는데 계속 이렇게 shift가 일어납니다. > > 이유가 뭔지 정말 궁금합니다. > > 고수님들 답변을 부탁드립니다. > > 좋은 하루 되세요. > > ------------------------------------------------------------------ protocol이 어찌 되는지요? 그리고 FITC-Annexin V positive쪽으로 shift 된다고 하셨는데, 그건 당연한 결과 아닙니까? 왜 positive를 띠면 안되는지 설명을 해야겠네요. 혹시 fix를 어찌 하셨나요? cell 상태는 건강했나요? 분석상태를 봐야 정확한 답변이 될거 같아요. 일단 점검해 보세요. -
답변
김진님의 답변
2008-07-24- 0
먼저 답변 감사드립니다. 제가 알고 있기는 정상 세포의 경우 early apoptosis가 아닌상태에서는 phosphatidylserine이 막 바깥쪽으로 translocation이 될 이유가 없기 때문에 FITC-Annexin V positive쪽으로 shift되지 않아야 된다고 알고 있습니다. 정상 암세포의 경우도 마찬가지로 알고 있구요. Fix는 하지 않았구요. cell 상태는 현미경으로 관찰했구요. 상태는 건강했다고 말씀드릴 수 있겠습니다. 제가 궁금한 부분은 왜 apoptosis-inducing agent를 처리하지 않은 normal cancer cell이 FITC-Annexin V 를 처리하면 negative가 아닌 positive를 보이는 가 입니다. protocol은 저희 경우에는 cell을 TE로 떼어낸후, PBS washing을 한 차례하구요. 1*Annexin V binding buffer로 resuspension 시키고 여기에 FITC-Annexin V 5ul를 넣고 15분간 실온차광방치하고 나서 바로 FACS를 찍습니다. 혹 제가 놓치는 부분이 있다면 comment 해 주십시오. 감사합니다.