2008-08-18
org.kosen.entty.User@503f7888
장윤영(dana1121)
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GPCR관련 실험을 하고 있습니다.
GPCR (CB1 receptor)이 expression 된 stable cell line을 만들었습니다.
물론 sequencing, protein expression(band가 깨끗하게 single band로 나오지는 않았지만 추정 위치에 희미하게는 나왔어요...wild type은 확실히 깨끗하게 암것도 나오지 않구요... )까지 확인을 했습니다. 그런데 ligand(agonist/antagonist)를 처리 했는데 약물의 효과가 나타나지 않습니다. wild type cell과 별반차이가 없습니다.
왜일까요???
expression과정에서 문제가 있는걸까요???
ligand(agonist/antagonist)를 타사제품 혹은 다른 종류로...바꿔볼까요???
조언을 바랍니다...
- GPCR
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 1
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답변
정철웅님의 답변
2008-08-20- 0
정확한 답을 해 드리기에는 주신 정보가 충분하지 않지만 몇 가지 질문 겸 답을 드리겠습니다. Cell line에 CB1R 만 transfection 해서 cell line을 만드셨나요? - 원래의 cell에 CB1과 interaction 하는 G protein이 있는 것을 확인 하셨나요? ligand의 effect는 무엇으로 보셨는지요? Calcium? or cAMP? 이를 위한 유전자를 같이 발현 시키셨나요? assay는 어떤 방법을 사용했으며 사용 조건이나 시간대는 적절 했는지 점검 해 보셨나요? 또한 cell line은 대도록이면 발현양이 많은 것이 좋은 데 몇개나 colony로 부터 발현을 확인 하셨는지요? 위 질문에 대한 답변을 스스로 찾아 보시면 어느 정도 해답을 발견 하실 수 있으리라 생각됩니다. >GPCR관련 실험을 하고 있습니다. >GPCR (CB1 receptor)이 expression 된 stable cell line을 만들었습니다. >물론 sequencing, protein expression(band가 깨끗하게 single band로 나오지는 않았지만 추정 위치에 희미하게는 나왔어요...wild type은 확실히 깨끗하게 암것도 나오지 않구요... )까지 확인을 했습니다. 그런데 ligand(agonist/antagonist)를 처리 했는데 약물의 효과가 나타나지 않습니다. wild type cell과 별반차이가 없습니다. > >왜일까요??? > >expression과정에서 문제가 있는걸까요??? > >ligand(agonist/antagonist)를 타사제품 혹은 다른 종류로...바꿔볼까요??? > >조언을 바랍니다... >