2008-08-18
org.kosen.entty.User@3acd596e
이진옥(jolbio)
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안녕하세요...
이제 기초를 막 시작하게되었습니다.
real time PCR을 하다 궁금한 것이 있습니다.
genomic DNA에서 real-time PCR을 하려합니다. reference gene을 GApDH로 사용하려하는데
왜 primer design을 intron과 exon을 걸쳐서 design을 해야하나요?
- GApDH
- real-time PCR
- genomic DNA
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답변 2
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답변
송정민님의 답변
2008-08-19- 0
>안녕하세요... > >이제 기초를 막 시작하게되었습니다. > >real time PCR을 하다 궁금한 것이 있습니다. > >genomic DNA에서 real-time PCR을 하려합니다. reference gene을 GApDH로 사용하려하는데 > >왜 primer design을 intron과 exon을 걸쳐서 design을 해야하나요? gDNA는 intron과 exon이 공존합니다. 하지만 mRNA에는 exon만 있습니다. 만약 primer를 exon부분으로만 짜면 PCR하는 중에 mRNA도 증폭이 될수 있습니다. DNA뽑을때 mRNA가 같이 뽑혔다면요.. 그래서 만약 mRNA가 같이 뽑혀서 오염됐다고 하더라도 정확한 gDNA의 양을 알기 위해 intron과 exon사이 시퀀스를 사용해서 primer를 짜는 겁니다. 윗분은 mRNA 증폭하는 걸로 오해하셨네요.. 하지만 경험상 그렇게 복잡하게 primer짜지 않아도 실험 잘 됩니다. -
답변
한재석님의 답변
2008-08-19- 0
주로 mRNA의 level을 측정하기 위해 realtime q-PCR 방법을 많이 이용합니다. 이때 normalization을 house keeping gene인 GAPDH나 b-actin등을 이용합니다. 질문하신 내용에 대한 답은 mRNA와 genomic DNA를 쉽게 구별하기 위해서 입니다. mRNA에는 intron부분이 없기 때문이죠. 따라서 q-pcr condition으로는 genomic DNA가 증폭되지 않으므로, 순수한 mRNA의 양을 측정할 수 있습니다. >안녕하세요... > >이제 기초를 막 시작하게되었습니다. > >real time PCR을 하다 궁금한 것이 있습니다. > >genomic DNA에서 real-time PCR을 하려합니다. reference gene을 GApDH로 사용하려하는데 > >왜 primer design을 intron과 exon을 걸쳐서 design을 해야하나요?