2008-09-24
org.kosen.entty.User@4babd25
이경희(48364836)
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안녕하세요.
저는 제가 가지고 있는 protease의 MAPK signaling pathway를 알아보려고 하는데요.
raw264.7 cell을 사용할 예정입니다.
일단 제 protease는 endotoxin의 일종으로 inflammatory signaling에 관여하는 것으로 밝혀져있습니다.
지금 열심히 paper work를 하고있습니다만.
그런데 제가 모르는게 많아서 그런지
어떤식으로 실험을 진행해 나가야하는지..
어디서부터..
뭐부터 시작을 해야하는지..
모르겠네요.ㅠ
바쁘시더라도~
고수님들~
간략하게 scheme 이라도..
부탁드립니다.
- MAPK
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 1
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답변
정환석님의 답변
2008-09-24- 0
>안녕하세요. >저는 제가 가지고 있는 protease의 MAPK signaling pathway를 알아보려고 하는데요. >raw264.7 cell을 사용할 예정입니다. >일단 제 protease는 endotoxin의 일종으로 inflammatory signaling에 관여하는 것으로 밝혀져있습니다. > >지금 열심히 paper work를 하고있습니다만. >그런데 제가 모르는게 많아서 그런지 >어떤식으로 실험을 진행해 나가야하는지.. >어디서부터.. >뭐부터 시작을 해야하는지.. >모르겠네요.ㅠ > >바쁘시더라도~ >고수님들~ >간략하게 scheme 이라도.. >부탁드립니다. 먼저 다른 논문을 참고해 선생님께서 원하시는 방향과 비슷한 일을 한 것을 벤치마킹하는 것이 좋을듯합니다. 기본적으로 선생님의 protease가 endotoxine 활성을 갖는 다면 NO, TNF-a, il-6, il-1b 등을 측정하시고 positive control은 200ng/ml의 LPS를 사용하시면 비교하시 편하실듯합니다. 이때 MAPK signaling pathway inhibitor 도 각각 처리해 어떤 inhibitor가 효과가 있는지 확인한다면 좋을듯합니다. 이후에 MAPK signaling pathway를 Western blot으로 확인해 볼 필요하 있을 듯한데, 이는 반응 속도가 빠르기에 1시간 이내에 처리한 샘플을 많이 사용합니다. 참고로 cell signaling 사에 MAPK signaling pathway 항체 (phospholyation 된것과 안된것)를 적은 양으로 모아서 kit으로 판매하고 있으니 따로 따로 구입하는 것보다 훨씬 저렴합니다. 또한 MAPK signaling pathway inhibitor 도 적은 양으로 모아서 kit으로 (고마바이오텍에서 취급하고 있는 것으로 기억됩니다.) 구입하시면 경제적일듯십습니다. 이후에 MAPK signaling pathway에의해 영향을 받는 ap-1, nf-kb 등을 western blotting으로 확인하시면 될듯합니다.