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>starch를 이용한 amylase 활성 측정을 하고 있는데.. >실험결과가 많이 이상하네요.. >몇가지 질문사항이 있어서 그러는데.. > >첫째로, starch 종류가 다양한 것으로 알고 있습니다. >starch from corn, starch from rice, soluble starch,,등등,, >기질이 여러가지 있는데,, >DNS법으로는 보통 soluble starch를 많이 사용하더라고요.. >DNS법으로 측정시 starch from corn, starch from rice 등으로는 측정이 불가능하기 때문에 soluble starch를 사용하는 것인가요? > >두번째로, 현재 진행하고 있는 실험은 >soluble starch를 사용해서 진행하고 있는데요,, >soluble starch도 제품마다 grade가 다른것으로 알고 있습니다. >혹시 제품 grade가 높거나 낮은것을 사용한다면,, >이 둘의 활성 측정값이 많이 다를 수 있나요? >지금 실험의 문제가 pH별, 온도별,,,등, >모두 다른 조건에서 활성이 비슷하게 나타납니다.. >혹시 이것이 제품의 grade 때문에 나타날 수도 있을까요? >제 생각에는 grade와 상관없이 환원당만 제대로 생기면 될거 같은데,, >grade가 높다고 산물로 생기는 환원당이 적거나, 낮다고 환원당이 많거나,,할거 같지는 않거든요.. > >세번째로, 조효소액, 버퍼, 효소액을 넣어주고 반응을 하는것으로 알고 있는데,,이들의 넣어주는 순서에 따라서 나타나는 활성값이 크게 차이가 날수 있을까요? 제 생각에는 넣어주는 순서에 따라서도 어느정도 차이가 생길수는 있다고 생각되는데,, 그래도 pH별, 온도별, 등 반응 조건에 따라서도 어느정도 범위만큼만 차이가 날 수 있지, 모두 거의 일정하게 나타나지는 않을것이라 생각됩니다만,, >혹시나 하는 마음에 여쭙니다.. > >다른 친구는 똑같은 DNS법으로 xylanase 활성을 측정하고 있는데,, >결과가 잘 나오거든요,,, >amylase 활성 측정만 이러한 경우가 생기는 것인지,, >아니면 제가 놓치고 있는 다른 부분이 있는것인지,, >amylase 활성 측정 시에만 다른 과정을 한번 더 거쳐야 하는것인지.. >명확한 답을 얻을 곳이 없네요.. > >amylase 활성을 측정해보신분들께서 >도움을 좀 주셨으면합니다.. > >감사합니다..^^> 첫째, 효소반응 자체가 수용액 상태에서 수행하기 때문에 반응 미디어에 녹을 수 있는 soluble starch를 사용하게 됩니다. 보통 amylase 활성 측정시에 사용하는 soluble starch 농도는 0.1 ~ 1% 사이 입니다. 둘째, 아무래도 사용되는 soluble starch의 purity (grade)가 활성 측정에 영향을 미칠 수 있습니다. Purity가 낮은 경우에는 impurity가 효소의 inhibitor로 작용하거나 효소 농도 측정시 에러의 원인이 될 수 있습니다. 단순히 효소 활성만을 확인하는 차원이라면 문제 없겠지만 데이터로 쓸 경우에는 purity도 중요합니다. 세째, 버퍼를 사용하는 목적은 효소의 최적 활성을 나타내는 pH를 유지시켜주고 효소 자체의 안정성 때문에 사용하게 됩니다. 따라서 모든 실험은 버퍼제조후에 효소액, 기질, 조효속 등을 첨가하여 테스트 해야 될 것으로 생각됩니다. 조효소액이나 단순 효소액만을 먼저 넣게 된다면 효소 활성에 차이가 생길수 있을거 같습니다.

>starch를 이용한 amylase 활성 측정을 하고 있는데..>실험결과가 많이 이상하네요..>몇가지 질문사항이 있어서 그러는데..>>첫째로, starch 종류가 다양한 것으로 알고 있습니다.>starch from corn, starch from rice, soluble starch,,등등,,>기질이 여러가지 있는데,,>DNS법으로는 보통 soluble starch를 많이 사용하더라고요..>DNS법으로 측정시 starch from corn, starch from rice 등으로는 측정이 불가능하기 때문에 soluble starch를 사용하는 것인가요?>>두번째로, 현재 진행하고 있는 실험은>soluble starch를 사용해서 진행하고 있는데요,,>soluble starch도 제품마다 grade가 다른것으로 알고 있습니다.>혹시 제품 grade가 높거나 낮은것을 사용한다면,,>이 둘의 활성 측정값이 많이 다를 수 있나요?>지금 실험의 문제가 pH별, 온도별,,,등, >모두 다른 조건에서 활성이 비슷하게 나타납니다..>혹시 이것이 제품의 grade 때문에 나타날 수도 있을까요?>제 생각에는 grade와 상관없이 환원당만 제대로 생기면 될거 같은데,,>grade가 높다고 산물로 생기는 환원당이 적거나, 낮다고 환원당이 많거나,,할거 같지는 않거든요..>>세번째로, 조효소액, 버퍼, 효소액을 넣어주고 반응을 하는것으로 알고 있는데,,이들의 넣어주는 순서에 따라서 나타나는 활성값이 크게 차이가 날수 있을까요? 제 생각에는 넣어주는 순서에 따라서도 어느정도 차이가 생길수는 있다고 생각되는데,, 그래도 pH별, 온도별, 등 반응 조건에 따라서도 어느정도 범위만큼만 차이가 날 수 있지, 모두 거의 일정하게 나타나지는 않을것이라 생각됩니다만,,>혹시나 하는 마음에 여쭙니다..>>다른 친구는 똑같은 DNS법으로 xylanase 활성을 측정하고 있는데,,>결과가 잘 나오거든요,,,>amylase 활성 측정만 이러한 경우가 생기는 것인지,,>아니면 제가 놓치고 있는 다른 부분이 있는것인지,,>amylase 활성 측정 시에만 다른 과정을 한번 더 거쳐야 하는것인지..>명확한 답을 얻을 곳이 없네요..>>amylase 활성을 측정해보신분들께서>도움을 좀 주셨으면합니다..>>감사합니다..^^ 첨부자료