KOSEN 한인과학기술자네트워크

닫기

더 많은 혜택을 위해
로그인 하세요.

지식나눔

지식나눔

point mutation 과 Dpn1에 대해 궁금합니다.

2008-11-13 org.kosen.entty.User@31803bb9 문창훈(windkail)
  • 1
안녕하세요. ^ㅡ^ point mutation의 과정과 Dpn1의 역할(methylation된 것을 인식하여 끊는다는건 알고있는데 왜 그렇게 작용하는지), PCR product 처리 과정이 궁금합니다. 그럼 모두 즐거운 저녁 보내세요. 답변 부탁드립니다. ^ㅡ^
  • point
  • mutation
  • Dpn1
지식의 출발은 질문, 모든 지식의 완성은 답변! 
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
답변하기
답변 1
  • 답변

    박재영님의 답변

    2008-11-25
    • 0
    일반적으로 mutation 시키고자 하는 template 로 이용할 plasmid vector (construct) 는 E.coli 내부에서 복제, 증폭 시키잖아요. E.coli는 in vivo 라고 볼수 있기 때문에 자체의 metylase에 의해 그 plasmid를 metylation 시킵니다. 그래서 metylated template가 되는거구요 반면 mutation 시키는 과정은 point muation이 있는 primers를 이용해서 PCR tube 내부에서 일어나잖아요. 그렇기 때문에 mutated PCR product는 in vitro 상태니까 non-metylated plasmid가 되는 것죠. 그래서 DpnI에 의해서 non-mutated template plasmid만 제거되고 mutant form의 plasmid는 남게 되는 거구요. 처리 과정은 간단히 말씀 드리면요. 일단 PCR을 진행하고 나서 PCR purification kit등을 이용해서 PCR mixture에서 DNA들만 분리해 냅니다. 이 DNA들에는 mutant form과 non-mutant template가 섞여 있겠죠? 이 DNA에 DpnI을 처리하면 template는 제거되고 이걸 다시 한번 PCR purification kit을 이용해 순수한 DNA만 분리해내면 mutant form DNA만 남는거죠. 자세한 내용은 protocol을 찾아보세요
    답변수정
    일반적으로 mutation 시키고자 하는 template 로 이용할 plasmid vector (construct) 는 E.coli 내부에서 복제, 증폭 시키잖아요. E.coli는 in vivo 라고 볼수 있기 때문에 자체의 metylase에 의해 그 plasmid를 metylation 시킵니다. 그래서 metylated template가 되는거구요 반면 mutation 시키는 과정은 point muation이 있는 primers를 이용해서 PCR tube 내부에서 일어나잖아요. 그렇기 때문에 mutated PCR product는 in vitro 상태니까 non-metylated plasmid가 되는 것죠. 그래서 DpnI에 의해서 non-mutated template plasmid만 제거되고 mutant form의 plasmid는 남게 되는 거구요. 처리 과정은 간단히 말씀 드리면요. 일단 PCR을 진행하고 나서 PCR purification kit등을 이용해서 PCR mixture에서 DNA들만 분리해 냅니다. 이 DNA들에는 mutant form과 non-mutant template가 섞여 있겠죠? 이 DNA에 DpnI을 처리하면 template는 제거되고 이걸 다시 한번 PCR purification kit을 이용해 순수한 DNA만 분리해내면 mutant form DNA만 남는거죠. 자세한 내용은 protocol을 찾아보세요
    등록된 댓글이 없습니다.
목록
목록