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지식나눔

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MTT assay 실험 질문입니다.

2009-01-06 org.kosen.entty.User@1eb9778a 소은미(soeunmi)
  • 2
MTT assay set up 과정중인데요... control만 봤을때 cell 이 일정하게 깔리지 않습니다.. 머랄까... cell이 약간 무거운 느낌이 들어서 만약 12 wall 에 깔은다고 했을때 첫번째 wall은 양이 많은데 점점 뒤에 wall로 갔을때( 12번째 wall에서는) cell양이 줄어 있습니다. 그래서 깔면서 계속해서 섞어주면서 분주하였더니 wall별로 눈으로 봤을때는 큰차이가 없으나 abs값은 약간의 오차가 있네요... CT-26, AGS cell 인데 무슨 문제인가요? 답변 좀 주세요....
  • MTT
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답변 2
  • 답변

    구선영님의 답변

    2009-01-06
    • 0
    실험 set-up하시는데 도움이 되면 좋겠습니다. 제가 아는 대로 조언을 드리자면, 우선 cell 심을 때 잘 섞으시고요, seeding은 최대한 정확하고 빠르게 하시고요, 뒤로 갈수록 cell이 적어진다면 multidispenser를 사용할 때 한번에 12줄을 다 심지 마시고 본인 생각에 그래도 균일하게 심어진다 싶은 만큼 심어 보세요. (예를 들면 6줄을 한번에, 혹은 4줄을 한번에 심는 식으로요) 시약처리도 다 하고 실험을 마치고나서 MTT assay를 할 때는 MTT-formazane crystal이 떨어져 나오지 않도록 조심해서 살살 pipet으로 하시고요. 적다보니 너무 기본적인 이야기만 적었네요. 다 아는 내용일텐데... 요즘에는 MTT assay와 동일한 원리인데, 배지를 제거하지 않고 발색시킬 수 있는 다른 kit 들도 많이 있습니다. XTT, WST-1, MTS...이런 것들요. 물론, 가격이 MTT 보다 조금 비쌀거 같은데요. 실험과정을 많이 줄여서 error 생길 소지를 많이 줄여 줍니다. 이런 방법도 고려해 보시면 도움이 될 것 같습니다. 빠른 시간내에 좋은 소식 있으시길 바랍니다. >MTT assay set up 과정중인데요... > >control만 봤을때 cell 이 일정하게 깔리지 않습니다.. > >머랄까... cell이 약간 무거운 느낌이 들어서 만약 12 wall 에 깔은다고 했을때 첫번째 wall은 양이 많은데 점점 뒤에 wall로 갔을때( 12번째 wall에서는) cell양이 줄어 있습니다. > >그래서 깔면서 계속해서 섞어주면서 분주하였더니 wall별로 눈으로 봤을때는 큰차이가 없으나 abs값은 약간의 오차가 있네요... > >CT-26, AGS cell 인데 무슨 문제인가요? > >답변 좀 주세요.... > >
    답변수정
    실험 set-up하시는데 도움이 되면 좋겠습니다. 제가 아는 대로 조언을 드리자면, 우선 cell 심을 때 잘 섞으시고요, seeding은 최대한 정확하고 빠르게 하시고요, 뒤로 갈수록 cell이 적어진다면 multidispenser를 사용할 때 한번에 12줄을 다 심지 마시고 본인 생각에 그래도 균일하게 심어진다 싶은 만큼 심어 보세요. (예를 들면 6줄을 한번에, 혹은 4줄을 한번에 심는 식으로요) 시약처리도 다 하고 실험을 마치고나서 MTT assay를 할 때는 MTT-formazane crystal이 떨어져 나오지 않도록 조심해서 살살 pipet으로 하시고요. 적다보니 너무 기본적인 이야기만 적었네요. 다 아는 내용일텐데... 요즘에는 MTT assay와 동일한 원리인데, 배지를 제거하지 않고 발색시킬 수 있는 다른 kit 들도 많이 있습니다. XTT, WST-1, MTS...이런 것들요. 물론, 가격이 MTT 보다 조금 비쌀거 같은데요. 실험과정을 많이 줄여서 error 생길 소지를 많이 줄여 줍니다. 이런 방법도 고려해 보시면 도움이 될 것 같습니다. 빠른 시간내에 좋은 소식 있으시길 바랍니다. >MTT assay set up 과정중인데요... > >control만 봤을때 cell 이 일정하게 깔리지 않습니다.. > >머랄까... cell이 약간 무거운 느낌이 들어서 만약 12 wall 에 깔은다고 했을때 첫번째 wall은 양이 많은데 점점 뒤에 wall로 갔을때( 12번째 wall에서는) cell양이 줄어 있습니다. > >그래서 깔면서 계속해서 섞어주면서 분주하였더니 wall별로 눈으로 봤을때는 큰차이가 없으나 abs값은 약간의 오차가 있네요... > >CT-26, AGS cell 인데 무슨 문제인가요? > >답변 좀 주세요.... > >
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  • 답변

    신재욱님의 답변

    2009-01-07
    • 0
    일반적으로 어떠한 Assay이든간에 정확성을 확인하기 위하여 triplicate를 수행하게 됩니다. 님의 경우는 triplicate로 수행하였는지 확인할 길은 없으나 만약 1번 well에 세포가 많이 첨가되고 12번 well이 적게 첨가 되어 결과가 이상하게 나오는 경우같으면 아래와 같은 원인을 생각해 볼수 있겠네요 1. 세포를 well에 첨가하기 전에 aggregation되어 있는 cell을 제대로 풀지 못한점. 2. 세포를 흔들면서 한곳으로 치우치고 치우친 곳이나 빈곳에서 pipetting한 것 3. MTT assay시 MTT를 첨가하고 stop solution을 첨가하기 전에 원심분분리후 상등액을 제대로 제거하지 못하여 이물질이 detection 된점 4. Multi-pipette를 이용하지 못하여 well상에 균일하게 첨가 되지 못한점 5. MTT assay시 96well를 사용하게 되는데 일반적으로 1(가로 1), A(세로 1), 12(가로 12), H(세로 8)는 시용하지 않습니다. 시험적 오차가 많이 생기기 때문에 2번-11번 , B-G well부터 사용합니다. 좋은 결과 있으시길 바라겠습니다.
    답변수정
    일반적으로 어떠한 Assay이든간에 정확성을 확인하기 위하여 triplicate를 수행하게 됩니다. 님의 경우는 triplicate로 수행하였는지 확인할 길은 없으나 만약 1번 well에 세포가 많이 첨가되고 12번 well이 적게 첨가 되어 결과가 이상하게 나오는 경우같으면 아래와 같은 원인을 생각해 볼수 있겠네요 1. 세포를 well에 첨가하기 전에 aggregation되어 있는 cell을 제대로 풀지 못한점. 2. 세포를 흔들면서 한곳으로 치우치고 치우친 곳이나 빈곳에서 pipetting한 것 3. MTT assay시 MTT를 첨가하고 stop solution을 첨가하기 전에 원심분분리후 상등액을 제대로 제거하지 못하여 이물질이 detection 된점 4. Multi-pipette를 이용하지 못하여 well상에 균일하게 첨가 되지 못한점 5. MTT assay시 96well를 사용하게 되는데 일반적으로 1(가로 1), A(세로 1), 12(가로 12), H(세로 8)는 시용하지 않습니다. 시험적 오차가 많이 생기기 때문에 2번-11번 , B-G well부터 사용합니다. 좋은 결과 있으시길 바라겠습니다.
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