2009-04-06
org.kosen.entty.User@314e0790
장윤영(nimana)
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전 Dendritic cell (TNF maturation DCs) 을 가지고 MCF7 (breast tumor cell line)을 fusion 하려고 합니다.
논문에서 eletrofusion 과 PEG (polyethylen glycol)이 있는데
전 50% PEG 1500을 가지고 실험을 합니다.
논문을 정리하여 사용하고 있는데 실험이 잘안되네요..ㅠㅠ
dendritic과 tumor 을 1:3로 믹스하고
37 도씨 PEG을 1ml처가해서 3분 그리고 PRMI(FBS없는) 1ml을 추가해서 3분 또 PRMI(FBS없는) 3ml을 추가해서 3분 그리고 PRMI(FBS없는) media로 2번 washing하고 GM-CSF 20ng/ml PRMI로 2*10^5/ml을 세포를 하루 정도 키움니다.
근데 fusion이 거의 일어나지 않으니 방법이 잘못되건지
아님 무슨 잘못이 있는건지 알수 가 없네요
결과는 facs로 보는데
한 4%정도 나오네요..
알고 계신분은 좀 알려주십시요..ㅠㅠ
아님 메일로 보내주세요 nimana@empal.com
키워드: fusion, hybrid, dendritic
- dendritic
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답변 1
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답변
서기원님의 답변
2010-01-04- 0
fusion은 딱히 방법이 없습니다.. 일반적인 protocol.이 있고 거기에서.. 실험자가 적당하게 변형 시켜야 합니다.. 특히 중요한게.. cell 비율.. 1:3 1:1 3:1 등 다양하게 해보시고 또, tumer cell의 상태 매우 중요합니다.. 패시즈 너무 오래되지 않고 좋은거 사용하세요. 님의 세포 상태가 좋지 않으면 새로 녹여서 사용하시거나, 새로 구입하시거나, 다른 tumer cell line 사용하시던지.. 그리고 실험 방법은 간단히 올리셔서 정확하게 하고 계신지 모르겠는데.. PEG 넣을때 온도, 그리고 washing 할때 media 서서히 넣어주는거 40ml 을 10분정도 걸려서 넣어줌니다. 이런거 중요해요.. b-cell hybridoma 가 fusion 시 젤 잘 정립된 방법입니다.. monoclonal 항체 제작시 사용하는 fuion 방법 참고하시면 도움이 될꺼 같습니다..