2009-04-07
org.kosen.entty.User@9882424
김주동(syncn310)
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제목에서 처럼 저렇게 작은 사이즈의 단백질을 western으로 잡을 수가 있나요?
왠만하면 elisa로 하고 싶지만 교수님이 western 으로 해보라고 하시는 바람에~ -0-
저정도 사이즈의 단백질로 실험하신 선생님들의 조언을 듣고 싶습니다~
감사합니다^^
아 참고로 sample은 cell이 아닌 tissue를 갈아서 사용하였습니다~ ㅡㅡㅋ
혹시 몰라서~ -0-
- western blot
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 3
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답변
최준영님의 답변
2009-04-07- 0
>제목에서 처럼 저렇게 작은 사이즈의 단백질을 western으로 잡을 수가 있나요? > >왠만하면 elisa로 하고 싶지만 교수님이 western 으로 해보라고 하시는 바람에~ -0- > >저정도 사이즈의 단백질로 실험하신 선생님들의 조언을 듣고 싶습니다~ > >감사합니다^^ > >아 참고로 sample은 cell이 아닌 tissue를 갈아서 사용하였습니다~ ㅡㅡㅋ > >혹시 몰라서~ -0- 충분히 잡습니다... Hexahistidine(His6)도 된답니다. Ab만 있다면 western 하는데 사이즈는 걱정 안하셔도 됩니다. -
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신재욱님의 답변
2009-04-08- 0
Insulin 경우 분자량이 약 6,000 정도 이지만 충분히 western을 할 수 있습니다. 다만 tissue를 파쇄하여 시료를 제작했다면 약간의 조정제를 걸치면 좀 더 깨끗한 결과를 얻으실 수 있을 것 같습니다. PAGE gel상에서 단백 농도가 너무 높거나 불순물이 너무 많으면 끌릴 수 있기 때문입니다. 또한 검출에 사용하실 항체의 경우 tissue에서 얻어진 단백질에 대하여 affinity적인 차이가 있을 수 있기 때문에 처음에는 고농도로 사용하시고 검출 확인이 되시면 저농도로 깨끗한 결과를 얻으실 것을 권해드리고 싶습니다. 물론 western blot을 하기 전에 PAGE gel의 농도 확인도 잊지 마시구요. -
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전정용님의 답변
2009-06-30- 0
Ab만 제대로 된것이라면 사이즈와 상관없이 잘 잡습니다 너무 작은 경우에는 loading하는 단백질의 양을 높이시는것도 좋습니다. >제목에서 처럼 저렇게 작은 사이즈의 단백질을 western으로 잡을 수가 있나요? > >왠만하면 elisa로 하고 싶지만 교수님이 western 으로 해보라고 하시는 바람에~ -0- > >저정도 사이즈의 단백질로 실험하신 선생님들의 조언을 듣고 싶습니다~ > >감사합니다^^ > >아 참고로 sample은 cell이 아닌 tissue를 갈아서 사용하였습니다~ ㅡㅡㅋ > >혹시 몰라서~ -0-
참고로 말씀드리자면... EGF나 IGF-1같은 growth factor류들도 기껏해봐야 5~8kDa입니다. ELISA가 된다면, antibody가 있다는겁니다... ELISA되는것들은 Western도 된다고 보시면 됩니다.