2009-04-08
org.kosen.entty.User@2781f823
서지민(jimin83)
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제가 PS2 DNA를 신경세포랑 암세포 등에 transfection 시키고 있는데
한거랑 안한거랑 거의 차이가 없는 것 같아요
stable cell line만드는 것두 쉽지 않고..(G418치고 콜로니뜰때까지 기다렸는데 다 죽네요 농도도 250 microgram/microliter밖에 안되는데......)
GFP를 1:1로 넣어서도 해 봤는데 GFP는 보이거든요 20%정도
참 답답합니다....ㅠ.ㅠ
- transfection
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답변 5
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답변
장성재님의 답변
2009-04-08- 0
어려운 실험을 하시네요. 우선, transfection 후에 G418로 selection을 하실 때 농도가 낮다고 하시는데 250 microgram/mL이라면 몰라도 상당히 높은 농도에서 seelection을 하시고 계신 듯한 인상이 드는군요. 그리고, transfection 방법은 어떤 방법을 사용하시는지, 또한, selection 후에 원하시는 유전자가 도입되었다는 확인을 어떻게 하시는지, 어떤 부분에서 miss 혹은 개선할 부분이 있는지를 설명해 주셔야 상담이 가능할 것으로 보입니다. 물론, 일반적으로 GFP는 20% 이상 transfection efficiency가 확인됩니다. >제가 PS2 DNA를 신경세포랑 암세포 등에 transfection 시키고 있는데 > >한거랑 안한거랑 거의 차이가 없는 것 같아요 > >stable cell line만드는 것두 쉽지 않고..(G418치고 콜로니뜰때까지 기다렸는데 다 죽네요 농도도 250 microgram/microliter밖에 안되는데......) > >GFP를 1:1로 넣어서도 해 봤는데 GFP는 보이거든요 20%정도 > >참 답답합니다....ㅠ.ㅠ > > -
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박재봉님의 답변
2009-04-08- 0
>제가 PS2 DNA를 신경세포랑 암세포 등에 transfection 시키고 있는데 > >한거랑 안한거랑 거의 차이가 없는 것 같아요 > >stable cell line만드는 것두 쉽지 않고..(G418치고 콜로니뜰때까지 기다렸는데 다 죽네요 농도도 250 microgram/microliter밖에 안되는데......) > >GFP를 1:1로 넣어서도 해 봤는데 GFP는 보이거든요 20%정도 > >참 답답합니다....ㅠ Transfection방법에 따라 효율에 큰 차이가 납니다. Lipopectamine방법으로 안되면 Amaxa electroporation 방법으로 하면 신경세포같은 트랜스펙션이 잘 안되는 세포에 아주 효율적입니다. 트랜스펙션 방법을 바궈보시지요. -
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박순혜님의 답변
2009-04-13- 0
PS2 DNA가 plasmid vector인가요? 제 경험상, stable cell line은 최종 colony 선정까지 시간이 무지 많이 걸리므로.. 한번 실패할 경우 시간적 손실이 아주 많죠. 따라서 transfection 직후 transient expression을 확인하는 시험을 수행하셔야할 것 같습니다. transfection 하신 벡터가 제대로 워킹하는 벡터인지부터 확인해야하니까, SDS page나 ELISA 등으로 transient expression을 먼저 확인하신 후 진행하시는게 좋을 듯 합니다.. -
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전정용님의 답변
2009-06-30- 0
GFP 자체도 transfection 효율 자체가 너무 낮네요 transfection시 사용하시는 용액이 뭔지는 모르겠지만 시간이 정말 중요하더군요 protocol 잘 따르시구요 selection 꼭 하신후에 비교실험 하시는게 좋을거 같네요 >제가 PS2 DNA를 신경세포랑 암세포 등에 transfection 시키고 있는데 > >한거랑 안한거랑 거의 차이가 없는 것 같아요 > >stable cell line만드는 것두 쉽지 않고..(G418치고 콜로니뜰때까지 기다렸는데 다 죽네요 농도도 250 microgram/microliter밖에 안되는데......) > >GFP를 1:1로 넣어서도 해 봤는데 GFP는 보이거든요 20%정도 > >참 답답합니다....ㅠ.ㅠ > > -
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DELETED님의 답변
2010-01-05- 0
>제가 PS2 DNA를 신경세포랑 암세포 등에 transfection 시키고 있는데 > >한거랑 안한거랑 거의 차이가 없는 것 같아요 > >stable cell line만드는 것두 쉽지 않고..(G418치고 콜로니뜰때까지 기다렸는데 다 죽네요 농도도 250 microgram/microliter밖에 안되는데......) > >GFP를 1:1로 넣어서도 해 봤는데 GFP는 보이거든요 20%정도 > >참 답답합니다....ㅠ.ㅠ > > Re: 먼저 cell line에 맞는 transfection reagent를 결정하는 것이 중요합니다. 여러가지 회사의 cell line 별 효율이 보통 나와있고, 잘 되는 것부터 테스트 하여 먼저 transfection efficiency를 높이는 것이 우선입니다.