2009-04-24
org.kosen.entty.User@6cfacc97
주정훈(curior2000)
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Cellular Imaging에서 microtubule을 staining했는데 tubule이 다 깨져서 인지
tubule이 보이지 않습니다. microtubule이 잘깨지는건 알고 있었는데 깨져서 그런 것인가요? 잘 아시는 분의 조언 부탁드립니다. fixation이나 그 밖의 과정에서 주의 할점도 부탁드립니다.
기본적인 과정은 Fixation 30분(3.7% formaldehyde) permeabilize 30분(0.1% Triton X-100 in PBS) 그리고 blocking 1시간 (2% BSA in TBST,triton)
primary는 anti-tubulin을 사용하고 secondary는 anti-mouse IgG(FITC-con)을 사용합니다. 1차, 2차 모두 한시간이고 모든 과정은 실온에서 진행됩니다.
많은 도움 부탁드립니다 . 감사합니다.
- Cell Image
- microtubule
- staning
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 1
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답변
전정용님의 답변
2009-06-11- 0
antibody dilution 비율이 얼마인지 모르겠지만 일단 좀 높여보시구요, blocking 시간도 좀 줄여보시면서 적정 조건을 잡으셔야 할거 같네요. tubulin 깨진것과 무관하게 signal 자체가 약하네요 >Cellular Imaging에서 microtubule을 staining했는데 tubule이 다 깨져서 인지 >tubule이 보이지 않습니다. microtubule이 잘깨지는건 알고 있었는데 깨져서 그런 것인가요? 잘 아시는 분의 조언 부탁드립니다. fixation이나 그 밖의 과정에서 주의 할점도 부탁드립니다. >기본적인 과정은 Fixation 30분(3.7% formaldehyde) permeabilize 30분(0.1% Triton X-100 in PBS) 그리고 blocking 1시간 (2% BSA in TBST,triton) >primary는 anti-tubulin을 사용하고 secondary는 anti-mouse IgG(FITC-con)을 사용합니다. 1차, 2차 모두 한시간이고 모든 과정은 실온에서 진행됩니다. >많은 도움 부탁드립니다 . 감사합니다.