2009-04-25
org.kosen.entty.User@394add25
박재성(chrisrub)
- 4
Sephadex LH-20을 에탄올에 팽윤시킨뒤 컬럼에 패킹한후
에탄올을 계속 흘려주면서 컬럼을 평형화 시키고 있습니다
평형화 시킬때 용출되는 에탄올을 일부 받아서 흡광도를 측정해 보니
3이상의 값을 나타내었습니다(Blank:100% 에탄올).
컬럼을 평형화 시키는 용매도 분명 100% 에탄올인데
이렇게 흡광도의 차이가 나는 이유를 도저히 모르겠네요~ㅠㅠ
컬럼에 문제가 있는건 같긴한데,,,,
도움 부탁드릴께요!
- sephadex LH-20
지식의 출발은 질문, 모든 지식의 완성은 답변!
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
답변 4
-
답변
이상후님의 답변
2009-04-27- 2
>Sephadex LH-20을 에탄올에 팽윤시킨뒤 컬럼에 패킹한후 > >에탄올을 계속 흘려주면서 컬럼을 평형화 시키고 있습니다 > >평형화 시킬때 용출되는 에탄올을 일부 받아서 흡광도를 측정해 보니 > >3이상의 값을 나타내었습니다(Blank:100% 에탄올). > >컬럼을 평형화 시키는 용매도 분명 100% 에탄올인데 > >이렇게 흡광도의 차이가 나는 이유를 도저히 모르겠네요~ㅠㅠ > >컬럼에 문제가 있는건 같긴한데,,,, > >도움 부탁드릴께요! 흡광도를 측정하실때, 파장을 선택해서 특정 nm에서 측정하셨는지요? 아니면 scan mode로 측정했는지요? 만약 전자라면 ethanol의 UV cutoff가 210 nm인데 혹시 이 근처에서 세팅하고 측정했는지 확인이 필요할 것으로 생각됩니다. 후자의 경우라면 Sephadex LH-20자체를 에탄올에 suspensiont시켜서 측정했다면 이론상으로 3이상의 값은 나오지 않을것입니다. 다른 이유가 될 수 있는것중에 혹시 그 컬럼 자체에 흡광을 할 수 있는 물질이 원래부터 있었을 수도 있구요..그렇다면 레진 패킹전에 컬럼 자체를 washing하고 진행하는것이 어떨까 싶네요.. -
답변
이상후님의 답변
2009-04-27- 2
>Sephadex LH-20을 에탄올에 팽윤시킨뒤 컬럼에 패킹한후 > >에탄올을 계속 흘려주면서 컬럼을 평형화 시키고 있습니다 > >평형화 시킬때 용출되는 에탄올을 일부 받아서 흡광도를 측정해 보니 > >3이상의 값을 나타내었습니다(Blank:100% 에탄올). > >컬럼을 평형화 시키는 용매도 분명 100% 에탄올인데 > >이렇게 흡광도의 차이가 나는 이유를 도저히 모르겠네요~ㅠㅠ > >컬럼에 문제가 있는건 같긴한데,,,, > >도움 부탁드릴께요! 유기용매를 이동상으로 사용할 때는 보통 teflon재질의 tubing line을 사용합니다. 시약주문하는 곳에서 일반적으로 취급합니다.
-
답변
김범수님의 답변
2010-01-13- 0
>Sephadex LH-20을 에탄올에 팽윤시킨뒤 컬럼에 패킹한후 > >에탄올을 계속 흘려주면서 컬럼을 평형화 시키고 있습니다 > >평형화 시킬때 용출되는 에탄올을 일부 받아서 흡광도를 측정해 보니 > >3이상의 값을 나타내었습니다(Blank:100% 에탄올). > >컬럼을 평형화 시키는 용매도 분명 100% 에탄올인데 > >이렇게 흡광도의 차이가 나는 이유를 도저히 모르겠네요~ㅠㅠ > >컬럼에 문제가 있는건 같긴한데,,,, > >도움 부탁드릴께요! UV 280nm에서 3이상이라고 하면 UV측정기 오류이거나 sephadex LH-20이 오염되었을 가능성이 있습니다. elution buffer로 washing 후에 다시 사용해보시는 것이 좋을 것 같습니다. -
답변
안길홍님의 답변
2010-01-25- 0
첨부파일
>Sephadex LH-20을 에탄올에 팽윤시킨뒤 컬럼에 패킹한후 > >에탄올을 계속 흘려주면서 컬럼을 평형화 시키고 있습니다 > >평형화 시킬때 용출되는 에탄올을 일부 받아서 흡광도를 측정해 보니 > >3이상의 값을 나타내었습니다(Blank:100% 에탄올). > >컬럼을 평형화 시키는 용매도 분명 100% 에탄올인데 > >이렇게 흡광도의 차이가 나는 이유를 도저히 모르겠네요~ㅠㅠ > >컬럼에 문제가 있는건 같긴한데,,,, > >도움 부탁드릴께요! 참고자료
답변 감사드립니다.^^
펌프에 연결된 tygon tube의 유기용매에 의한 부식에 의해 용매에 문제가 있었네요..
혹시 유기용매에 의해 부식되지 않는 tube 재질에 대해 알고 계신가요?