2009-05-11
org.kosen.entty.User@548bc92
김정근(baramnamoo)
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제가 세균의 transformation 실험을 해서 mutant를 몇 개 만들었는데,
그 중에 alpha-glucosidase / cytochrome c oxidase gene을 건드린 mutant가 나왔습니다. 그래서 이 두 효소가 제 mutant에서 제대로 합성되는지 확인하기 위해 assay를 하려고 합니다.(같은 gene이 몇갠지 southern은 당연히 할 것이고;;)
그래서 방법을 찾아봤는데, 제가 이해력이 딸려서;;;
그 중에 이 assay를 진행하는데 바로 cell 배양액을 sample로 쓰는 건가요?
아님 효소를 추출해서 실험을 하는건지;;
제가 공부를 해야하는데 조금 급하게 여러 실험을 하다보니
그러니까 실험을 하기 위한 sample prep.방법을 알고 싶습니다.
잘 부탁드립니다.
- glucosidase
- cytochrome c oxidase
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 1
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답변
이상후님의 답변
2009-05-11- 0
>제가 세균의 transformation 실험을 해서 mutant를 몇 개 만들었는데, >그 중에 alpha-glucosidase / cytochrome c oxidase gene을 건드린 mutant가 나왔습니다. 그래서 이 두 효소가 제 mutant에서 제대로 합성되는지 확인하기 위해 assay를 하려고 합니다.(같은 gene이 몇갠지 southern은 당연히 할 것이고;;) >그래서 방법을 찾아봤는데, 제가 이해력이 딸려서;;; > >그 중에 이 assay를 진행하는데 바로 cell 배양액을 sample로 쓰는 건가요? >아님 효소를 추출해서 실험을 하는건지;; > >제가 공부를 해야하는데 조금 급하게 여러 실험을 하다보니 >그러니까 실험을 하기 위한 sample prep.방법을 알고 싶습니다. > >잘 부탁드립니다. Crude한 cell 배양액으로 assay하는 경우도 있습니다. 그리고 보통은 이 방법을 많이 쓰기도 합니다. 왜냐하면 효소를 정제해서 assay하려면 몇 단계 정제 단계를 거쳐야 되는데 이 과정에서 sample loss나 enzyme activity가 상당부분 떨어지게 됩니다. 아주 정확한 Km이나 Vmax 등과 같은 parameter들을 구하기 위해서는 정제해서 분석하시길 권합니다.