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지식나눔

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ALP 염색

2009-06-11 org.kosen.entty.User@3d82cc7c 홍경미(pikomi)
  • 1
세포가 골화가 되었는지 확인하기 위해 alkaline phosphatase염색과 von kossa염색을 했는데 von kossa염색으로는 골화가 된 것을 확인할수 있었는데 alkaline phosphatase염색은 전혀 안됩니다. 무엇이 문제일까요? 혈액을 가지고도 해 봤는데 안되더군요. 염색은 sigma-aldrich(No. 85)를 가지고 실시했습니다. 염색시 주의사항과 ALP염색으로 양성반응이 나오는 경우를 확인 하고 싶은데 무엇을 가지고 실험을 해보면 좋을까요?
  • ALP
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답변 1
  • 답변

    장성재님의 답변

    2009-06-11
    • 0

    첨부파일

    세포의 골화를 확인하시는 방법으로는 일반적으로 골세포의 분화를 측정하는 염색법 (osteoblast와 osteoclast를 각각 다른 두가지 염색법을 사용하여 구분)을 사용합니다. 한국에서도 쉽게 구하실 수 있는 키트 (Takara Bio.)가 있으므로 한번 체크해 보시길 권합니다. 메뉴얼을 첨부하니 참고 바랍니다. 직접 시약을 만들어 하실 수도 있습니다. Alkaline phosphatase (ALP)- For Osteoblast Freshly prepared incubation medium consisted of 25 mg of alpha-naphthyl phosphate disodium salt (Sigma, St Louis, Missouri) and 25 mg of Fast Violet B salt (Sigma) in 25 ml of 0.05M Tris-HC1 buffer (pH 10.5) containing 0.025M MgC12. Sections were incubated for seven minutes at 37°C, rinsed in reaction buffer, postfixed for 15 minutes in aqueous 10% paraformaldehyde and mounted with glycerol-gelatin (Sigma). Tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) - For Osteoclasts . The incubation medium consisted of : alpha-naphthyl phosphate and Fast Violet B dissolved in 25 ml of 0.05M Na acetate buffer (pH 5) containing 0.05M sodium tartrate (Sigma). Sections were incubated for 60 minutes at 37°C, rinsed in reaction buffer, postfixed and mounted as above. >세포가 골화가 되었는지 확인하기 위해 alkaline phosphatase염색과 von kossa염색을 했는데 von kossa염색으로는 골화가 된 것을 확인할수 있었는데 alkaline phosphatase염색은 전혀 안됩니다. 무엇이 문제일까요? 혈액을 가지고도 해 봤는데 안되더군요. >염색은 sigma-aldrich(No. 85)를 가지고 실시했습니다. > >염색시 주의사항과 ALP염색으로 양성반응이 나오는 경우를 확인 하고 싶은데 무엇을 가지고 실험을 해보면 좋을까요? >
    답변수정
    세포의 골화를 확인하시는 방법으로는 일반적으로 골세포의 분화를 측정하는 염색법 (osteoblast와 osteoclast를 각각 다른 두가지 염색법을 사용하여 구분)을 사용합니다. 한국에서도 쉽게 구하실 수 있는 키트 (Takara Bio.)가 있으므로 한번 체크해 보시길 권합니다. 메뉴얼을 첨부하니 참고 바랍니다. 직접 시약을 만들어 하실 수도 있습니다. Alkaline phosphatase (ALP)- For Osteoblast Freshly prepared incubation medium consisted of 25 mg of alpha-naphthyl phosphate disodium salt (Sigma, St Louis, Missouri) and 25 mg of Fast Violet B salt (Sigma) in 25 ml of 0.05M Tris-HC1 buffer (pH 10.5) containing 0.025M MgC12. Sections were incubated for seven minutes at 37°C, rinsed in reaction buffer, postfixed for 15 minutes in aqueous 10% paraformaldehyde and mounted with glycerol-gelatin (Sigma). Tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) - For Osteoclasts . The incubation medium consisted of : alpha-naphthyl phosphate and Fast Violet B dissolved in 25 ml of 0.05M Na acetate buffer (pH 5) containing 0.05M sodium tartrate (Sigma). Sections were incubated for 60 minutes at 37°C, rinsed in reaction buffer, postfixed and mounted as above. >세포가 골화가 되었는지 확인하기 위해 alkaline phosphatase염색과 von kossa염색을 했는데 von kossa염색으로는 골화가 된 것을 확인할수 있었는데 alkaline phosphatase염색은 전혀 안됩니다. 무엇이 문제일까요? 혈액을 가지고도 해 봤는데 안되더군요. >염색은 sigma-aldrich(No. 85)를 가지고 실시했습니다. > >염색시 주의사항과 ALP염색으로 양성반응이 나오는 경우를 확인 하고 싶은데 무엇을 가지고 실험을 해보면 좋을까요? >
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