2009-06-24
org.kosen.entty.User@1a93ae3f
윤승필(cyclone12)
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제가 neuropobe의 48well boyden chamber를 구매하여 migration실험을 하고 있습니다
하지만 여러가지 문제가 있어서 이렇게 문의 드립니다
1. boyden 챔버에 혈구 세포가 아닌 human mesenchymal stem cell을 넣고 거기에 ligand를 넣어서 세포의 이동을 측정하고자 하는데 세포를 trypsin처리를하여 상부 챔버에 넣는것이 맞는지요??
2. boyden chamber filter를 어디다가 고정하는 것이 가장 좋은지요?(에탄올, 메탄올) 아그리고 시간은 어느정도 고정하는 것이 좋은지??
3. stain 방법은 제가 디프 퀵으로 하는데 하나도 염색이 되지 않더군요 어떤 stain을 사용하는 것이 좋을까요?
4. 세포가 염색되었다면 카운터하는 방법은 어떻게 하는 것이 좋을지요?(pore가 너무 많아서 ？갈립니다요)
꼭 답좀주십시요 혹시 좋은 정보 있으면 연락주세요 cyclone12@naver.com입니다 부탁드립니다
- boyden chamber
- migration
- protocol
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 1
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답변
전정용님의 답변
2009-06-24- 0
1. 세포 subculture하듯이 single cell로 만드신 후에, 보통 5000~10000개 정도 upper chamber에서 하루 정도 culture 한 후에 실험을 합니다. 2. 고정시키는 방법은 실험실별로 다르겠지만, 저의 경우에는 4%PFA에 15분 정도 고정한 후 PBS로 washing하여 실행했습니다. 3. antibody를 사용한 실험이 아닌경우, 단순히 cell counting 용으로는 H&E staing 을 추천하고 싶습니다. 세포가 남아있다면 확실히 보실 수 있을겁니다. 4. upper chamber에 붙어있는 membrane을 잘 띄어내서 permount 용액 같은 것으로 mounting해서 현미경으로 확인하는 방법이 있습니다. 현미경 사진을 찍으신후에 컴퓨터 화면 보시면서 counting 하시면 수월하실거라 생각됩니다. 요즘에는 자동으로 counting 해주는 program도 있다고 하니 찾아보시면 방법은 많으실거라 생각됩니다. >제가 neuropobe의 48well boyden chamber를 구매하여 migration실험을 하고 있습니다 > >하지만 여러가지 문제가 있어서 이렇게 문의 드립니다 > >1. boyden 챔버에 혈구 세포가 아닌 human mesenchymal stem cell을 넣고 거기에 ligand를 넣어서 세포의 이동을 측정하고자 하는데 세포를 trypsin처리를하여 상부 챔버에 넣는것이 맞는지요?? > >2. boyden chamber filter를 어디다가 고정하는 것이 가장 좋은지요?(에탄올, 메탄올) 아그리고 시간은 어느정도 고정하는 것이 좋은지?? > >3. stain 방법은 제가 디프 퀵으로 하는데 하나도 염색이 되지 않더군요 어떤 stain을 사용하는 것이 좋을까요? > >4. 세포가 염색되었다면 카운터하는 방법은 어떻게 하는 것이 좋을지요?(pore가 너무 많아서 ？갈립니다요) > >꼭 답좀주십시요 혹시 좋은 정보 있으면 연락주세요 cyclone12@naver.com입니다 부탁드립니다 >