2009-08-16
org.kosen.entty.User@7ba195b0
곽서영(rhkrtj)
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그냥 TAE buffer에 녹인 agarose gel에서 RNA를 elution하려고 합니다..
freeze thaw법이 있는데 계속 회수율이 낮아서요...ㅜ
gel을 잘라 -70도에서 5분, 37도에서 5분, 다시 -70도에서 5분..
이렇게 5번 반복후 P.C.I처리 하고 EhOH precipitation방법으로 넘어갑니다..
뭐가 잘못됐는지....; 잘 회수가 안되요ㅜㅜ
RNA 양이 적은걸까요ㅜㅜ
advice좀.. 부탁드려요..
- RNA elution
- agarose
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답변 3
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답변
박수제님의 답변
2009-08-17- 0
RNA를 PCI로 안되실 껀데요.... RNA용 pheonol 있거든요.. pH가 틀린... 그거 사용하시고요... 얼렸다 녹였다 하시면... RNA 다 깨질 듯 한데요.... 굳이 꼭 RNA를 gel elution 해야 하시나요??? >그냥 TAE buffer에 녹인 agarose gel에서 RNA를 elution하려고 합니다.. > >freeze thaw법이 있는데 계속 회수율이 낮아서요...ㅜ > >gel을 잘라 -70도에서 5분, 37도에서 5분, 다시 -70도에서 5분.. >이렇게 5번 반복후 P.C.I처리 하고 EhOH precipitation방법으로 넘어갑니다.. >뭐가 잘못됐는지....; 잘 회수가 안되요ㅜㅜ >RNA 양이 적은걸까요ㅜㅜ > >advice좀.. 부탁드려요.. -
답변
DELETED님의 답변
2009-08-17- 0
>그냥 TAE buffer에 녹인 agarose gel에서 RNA를 elution하려고 합니다.. > >freeze thaw법이 있는데 계속 회수율이 낮아서요...ㅜ > >gel을 잘라 -70도에서 5분, 37도에서 5분, 다시 -70도에서 5분.. >이렇게 5번 반복후 P.C.I처리 하고 EhOH precipitation방법으로 넘어갑니다.. >뭐가 잘못됐는지....; 잘 회수가 안되요ㅜㅜ >RNA 양이 적은걸까요ㅜㅜ > >advice좀.. 부탁드려요.. Re: 그냥 DNA elution하듯이 gel extraction 하시면 됩니다. elution하실때 DEPC-treated DW혹은 RNase free water로 elution하시면 됩니다. 물론 manual 보다는 yield는 떨어지겠죠.. -
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신동욱님의 답변
2010-01-11- 0
>그냥 TAE buffer에 녹인 agarose gel에서 RNA를 elution하려고 합니다.. > >freeze thaw법이 있는데 계속 회수율이 낮아서요...ㅜ > >gel을 잘라 -70도에서 5분, 37도에서 5분, 다시 -70도에서 5분.. >이렇게 5번 반복후 P.C.I처리 하고 EhOH precipitation방법으로 넘어갑니다.. >뭐가 잘못됐는지....; 잘 회수가 안되요ㅜㅜ >RNA 양이 적은걸까요ㅜㅜ > Gel의 %를 0.8%까지 낮춰서 물리적으로 약하게 만들어서 위와 같은 방법을 진행하시면 수득률이 다소 높아질 것입니다. Gel을 녹이는 kit들이 많이 나와있으니, gel을 녹인 후에는 RNA 용 column을 사용하면 더 깨끗하게 얻으실 것입니다.