2009-09-01
org.kosen.entty.User@262ff530
김동희(kdh83618)
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Raw264.7 cell을 이용해서 RNA를 뽑을려고 하는데요
chloroform, ipp과정은 무난하게 하였는데
IPP제거후 pellet을 washing하기 위하여 75% EtOH를 200ul넣고 13,000rpm에서 10분간 washing하고 pellet을 확인 하였더니
pellet이 투명하게 바뀐것인지
녹은 것인지 암튼 눈에 보이지 않앗습니다
이런 경험은 처음이라 ㅠ
많은 답변 부탁드리겠습니다,
- RNA
- Raw264.7
- washing
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 4
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답변
박동현님의 답변
2009-09-01- 0
도움이 되실지 모르겠지만,제 경험으로는 nucleic acid pellet 들은 ethanol washing을 하면 isopropanol 에서 보다 더 명확해 지던데요. 혹시 75% EtOH의 농도가 좀 낮은게 아닌지요... >Raw264.7 cell을 이용해서 RNA를 뽑을려고 하는데요 >chloroform, ipp과정은 무난하게 하였는데 >IPP제거후 pellet을 washing하기 위하여 75% EtOH를 200ul넣고 13,000rpm에서 10분간 washing하고 pellet을 확인 하였더니 >pellet이 투명하게 바뀐것인지 >녹은 것인지 암튼 눈에 보이지 않앗습니다 >이런 경험은 처음이라 ㅠ >많은 답변 부탁드리겠습니다, -
답변
DELETED님의 답변
2009-09-01- 0
>Raw264.7 cell을 이용해서 RNA를 뽑을려고 하는데요 >chloroform, ipp과정은 무난하게 하였는데 >IPP제거후 pellet을 washing하기 위하여 75% EtOH를 200ul넣고 13,000rpm에서 10분간 washing하고 pellet을 확인 하였더니 >pellet이 투명하게 바뀐것인지 >녹은 것인지 암튼 눈에 보이지 않앗습니다 >이런 경험은 처음이라 ㅠ >많은 답변 부탁드리겠습니다, Re:보통의 경우 75% EtOH washing후 좀더 하얗게 보입니다. 그러나, 투명한것은 그만큼 깨끗하다고 생각하시면 됩니다. centrifuge를 하실때 tube방향을 생각하시어, 그부분에 pellet이 있다고 생각하시고 녹이시면 아마도 RNA를 recover할수 있습니다. -
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이호용님의 답변
2009-09-03- 0
>Raw264.7 cell을 이용해서 RNA를 뽑을려고 하는데요 >chloroform, ipp과정은 무난하게 하였는데 >IPP제거후 pellet을 washing하기 위하여 75% EtOH를 200ul넣고 13,000rpm에서 10분간 washing하고 pellet을 확인 하였더니 >pellet이 투명하게 바뀐것인지 >녹은 것인지 암튼 눈에 보이지 않앗습니다 >이런 경험은 처음이라 ㅠ >많은 답변 부탁드리겠습니다, 저도 그런 경험이 있습니다. RNA가 사라진걸로 착각할 수 있으나, 사실 잘 뽑힌것으로 봐도 무방합니다. 대신 자세히 보시면 투명한 부분의 pellet의 영역이 보이실 겁니다. 표시해 놓으시고 추후에 elution하실때 잘 녹이시면 됩니다. RNA를 뽑으신 다음에 spectrophotometer로 확인해 보시면 quality에도 큰 문제가 없음을 확인할 수 있으실 겁니다. -
답변
신동욱님의 답변
2010-01-10- 0
>Raw264.7 cell을 이용해서 RNA를 뽑을려고 하는데요 >chloroform, ipp과정은 무난하게 하였는데 >IPP제거후 pellet을 washing하기 위하여 75% EtOH를 200ul넣고 13,000rpm에서 10분간 washing하고 pellet을 확인 하였더니 >pellet이 투명하게 바뀐것인지 >녹은 것인지 암튼 눈에 보이지 않앗습니다 >이런 경험은 처음이라 ㅠ >많은 답변 부탁드리겠습니다, 75% EtOH는 washing용일 뿐입니다. Isopropanol 또는 100% EtOH로 C'fuge하시면 보실 수 있을 것입니다