2009-12-08
org.kosen.entty.User@116e73f8
이로운(pinky223)
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동결보존을 할 때
encapsulation, desiccation이란 용어가 나오는데
언제 사용되는 것인가요
동결보존의 단계인가요?
- 동결보존
- encapsulation
- desiccation
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 2
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답변
이상후님의 답변
2009-12-08- 0
> >동결보존을 할 때 >encapsulation, desiccation이란 용어가 나오는데 >언제 사용되는 것인가요 >동결보존의 단계인가요? > 두 방법 모두 급속동결보존방법중에 시료를 전처리 한 후의 동결건조법들입니다. 특히, encapsulation법은 시료중 특유의 향을 잃기 쉬운 것들에 대해서 사용되기도 합니다. 두가지 method가 사용되고 있는 protocol중 일부에 대해서 설명드리면, 1. Desiccation method - 작은 plastic petri-dish 안에 filter paper를 깔고 10% sucrose sol. 100 μL 적하함. - EC(직경 약 3 mm)를 pre-culture한 것과 안한 것을 각각 10여개씩 넣고 건조시간을 3시간과 5시간처리로 구분하였으니 결국 4처리가 됨. - 큰 petri-dish안에 EC를 넣은 작은 petri-dish를 넣고 - 건조된 silica gel(6 mesh이상, 청색대립, 球狀) 20 mL를 주변에 넣고 - EC를 치상한 petri-dish의 뚜껑을 열고, 큰 petri-dish의 뚜껑을 덮은 후 parafilm 으로 봉하여 clean bench 안에서 건조시킴. - 3시간, 5시간 후 LN에 넣을 작은 plastic bottle(Falcon bottle)에 넣고 마게를 한 후 급속히 LN에 저장함 - 40℃의 온수에 급속히 해동시킨 후 Hormone-free배지에 치상 후 25℃에서 dark culture함. 2. Encapsulation method - CaCl2ㆍ100 mM in 0.4 M sucrose을 Beaker에 부은 후 - 3% Na-alginate in 0.4 M sucrose을 부은 beaker 안에 encapsulation 시키고자 하는 somatic embryo, shoot tip, EC 등을 넣고 잘 저은 다음 Pasture pipette로 하나씩 흡입한 다음 CaCl2 용액속에 떨어뜨리면 encapsulation 됨. (Na-alginate의 점도(500, 550, 450 등)가 중요함.) - Encapsulation 후 dehydration method : 상기한 건조방법에 따라 silica gel 속 에 10∼12시간 가량 건조 후 냉동(LN)함. 크기 및 종류에 따라 건조시간이 다름. -
답변
안길홍님의 답변
2010-02-01- 0
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