2009-12-15
org.kosen.entty.User@2f718692
한태원(korea498)
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간조직에서 단백질 추출하고 boiling시 단백질이 익어버렸어요,.
간조직을 리파버퍼에 넣고 homogenizer로 간다음에 원심분리하고.
상등액만 따서 바로 boiling했더니 색이 회색으로 변하고 냄새가 고기 익은냄새가 나네요..
혹시 실험중 잘못한 부분이 있는지요..ㅜㅜ
- 간조직
- 단백질
- 추출
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답변 3
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답변
김홍기님의 답변
2009-12-24- 0
Human 인지 Rodent인지 모르겠네요. Rodent의 경우 perfusion을 통해서 혈액을 모두 제거하는 것이 blood contamination을 예방할 수 있습니다. 간의 경우 원래 냄새가 심합니다. 단백질 농도가 진한 것 같구요... 또한 간에 lipid가 특히 많아서 냄새가 그렇습니다. 리파양이 어느정도인지 몰라도 적정량을 더 넣고 homogenization을 하면 좋을 것 같습니다. 회색으로 변하는 것은 간 조직 색깔이 원래 짖은 것도 그렇고 남아 있는 혈액 때문인 것 같습니다. >간조직에서 단백질 추출하고 boiling시 단백질이 익어버렸어요,. > >간조직을 리파버퍼에 넣고 homogenizer로 간다음에 원심분리하고. > >상등액만 따서 바로 boiling했더니 색이 회색으로 변하고 냄새가 고기 익은냄새가 나네요.. > >혹시 실험중 잘못한 부분이 있는지요..ㅜㅜ -
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DELETED님의 답변
2010-01-05- 0
>간조직에서 단백질 추출하고 boiling시 단백질이 익어버렸어요,. > >간조직을 리파버퍼에 넣고 homogenizer로 간다음에 원심분리하고. > >상등액만 따서 바로 boiling했더니 색이 회색으로 변하고 냄새가 고기 익은냄새가 나네요.. > >혹시 실험중 잘못한 부분이 있는지요..ㅜㅜ RE: 혹시 sample buffer 없이 추출한 상층액만을 끓인건 아니겠죠? 제 경험상 liver 에서 RIPA buffer로 추출했을때 아무 문제 없었습니다. -
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신동욱님의 답변
2010-01-09- 0
>간조직에서 단백질 추출하고 boiling시 단백질이 익어버렸어요,. > >간조직을 리파버퍼에 넣고 homogenizer로 간다음에 원심분리하고. > >상등액만 따서 바로 boiling했더니 색이 회색으로 변하고 냄새가 고기 익은냄새가 나네요.. > >혹시 실험중 잘못한 부분이 있는지요..ㅜㅜ 세포와 달리 조직에서 추출한 샘플의 경우에는 단백질 분리후 boiling한 후에 냄새가 나는 경향이 있습니다. 색이 회색으로 변했다고 하는데, 5X sample buffer를 안넣고 boiling하신 것인가요? 보통은 파란색이 다소 옅어지는 데 확인 부탁 바랍니다