2010-01-22
org.kosen.entty.User@264dd647
이재일(lji1928)
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IgG을 protein A를 이용하여서 정제한 후에 peroxidase labeling 하여 HRP를 결합시켜 봤는데 실패하였습니다. 그래서 혹시 틀린 부분이나 제가 실수한 부분을 알려주실수 있나해서요.
우선 EZ-Link activated peroxidase antibody labeling kit(Thermo)을 사용하여 실험을 했습니다. 메뉴얼을 한번보니 정제과정이 있더라구요. 제가 이해한것은 정제가 안된 혈장에서 바로 컨쥬게이션 시킨후에 IgG만을 정제하는 걸로 이해했으며
저는 정제를 먼저 했기때문에 메뉴얼 앞쪽으 컨쥬게이션만 시켰습니다.
메뉴얼의 1~2번까지만 했는데 제가 실수 한건가요?
제가 처음 해보는거라 한글 메뉴얼도 없이 짧은 영어 실력으로 하는거라 잘못된 부분이 많은것 같아서 이렇게 도움 청합니다. 도와주세요
- IgG
- peroxidase labeling
- antibody
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답변
이상후님의 답변
2010-01-22- 2
>IgG을 protein A를 이용하여서 정제한 후에 peroxidase labeling 하여 HRP를 결합시켜 봤는데 실패하였습니다. 그래서 혹시 틀린 부분이나 제가 실수한 부분을 알려주실수 있나해서요. >우선 EZ-Link activated peroxidase antibody labeling kit(Thermo)을 사용하여 실험을 했습니다. 메뉴얼을 한번보니 정제과정이 있더라구요. 제가 이해한것은 정제가 안된 혈장에서 바로 컨쥬게이션 시킨후에 IgG만을 정제하는 걸로 이해했으며 >저는 정제를 먼저 했기때문에 메뉴얼 앞쪽으 컨쥬게이션만 시켰습니다. > >메뉴얼의 1~2번까지만 했는데 제가 실수 한건가요? > >제가 처음 해보는거라 한글 메뉴얼도 없이 짧은 영어 실력으로 하는거라 잘못된 부분이 많은것 같아서 이렇게 도움 청합니다. 도와주세요 매뉴얼에는 serum albumin이나 gellatin같이 분자량이 1만 이상인 물질이 포함되어 있으면, solution을 정제하라고 되어 있군요. 질문자분께서는 어떤 방식으로 정제를 하셨는지 확인해봐야 겠군요. 보통 ultrafiltration을 하는데 무슨 방법으로 정제를 하셨는지요? 만약에 제대로 정제가 안 됐으면 이런 불순물들이 labelling에 방해가 되어서 수율이 매우 낮어지게 됩니다. 그리고 샘플 solution이 혹시 녹지 않는 저분자량 물질과 섞여 있다면 centrifuge시켜서 supernatant만 사용해야 합니다. 다시 전 과정을 확인해 보세요..
감사합니다 Pprotein A를 이용하여 정제를 한후에 아미콘 튜브를 이용해서 농축을 시켰고요
SDS page gel 로 확인도 했습니다. 처음할려니 너무 어렵네요. 감사합니다.