2010-02-16
org.kosen.entty.User@308b4c4b
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Phosphorylation assay를 동위원소를 사용하지 않고 할 수 있는방법을 알고 싶습니다.
특정 단백질이 CK2나 PKC에 의해 Phosphorylation이 되는지를 알아보기위해
ATP를 넣어주어 이 효소를 Phosphorylation시켜서 이 단백질의 Phosphorylation 여부를 anti-phospho antibody로 WB을 하고 싶은데 이 실험을 하기위해 필요한 것들과 그 자세한 프로토콜을 부탁드립니다.
- Phosphorylation assay
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 1
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답변
전정용님의 답변
2010-02-25- 1
첨부파일
>Phosphorylation assay를 동위원소를 사용하지 않고 할 수 있는방법을 알고 싶습니다. > >특정 단백질이 CK2나 PKC에 의해 Phosphorylation이 되는지를 알아보기위해 >ATP를 넣어주어 이 효소를 Phosphorylation시켜서 이 단백질의 Phosphorylation 여부를 anti-phospho antibody로 WB을 하고 싶은데 이 실험을 하기위해 필요한 것들과 그 자세한 프로토콜을 부탁드립니다 기본적으로 anti-phospho antibody를 사용해서 WB을 해도 시그널이 너무 약한 단백질의 인산화가 아닌이상은 잘 나옵니다. 잘 나오지 않는다면 Immunoprecipitation(IP)를 해보심이 어떨런지요. IP이후에 WB방법은 동일하구요 보고자하시는 위치에 해당되는 anti-phospho antibody를 사용하시면 보이실겁니다. IP Protocol은 웹상에 많이 나와있구요 참고로 하나 첨부해드립니다.