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지식나눔

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cloning된 DNA을 real-time taqman PCR을 한후 의문점이있어서 질문을 올립니다

2010-06-30 org.kosen.entty.User@54d51eaf 이재일(lji1928)
  • 1
t-vector을 사용하여 cloning을 하였습니다. cloning된 sample(플라스미드에 mini prep된 sample)과 본래의 sample을 같이 real-time taqman PCR실험을 하였습니다. 본래의 sample에서의 조건으로 하였는데 본래의 sample은 25cycle에서 형광이 보이지만 cloning된 sample은 35cycle에서 10-fold로 희석한 sample이 거의 동시에 형광을 나타냅니다. cloning된 sample의 조건을 달리 해야하나요?? 몇가지의 조건을 달리해봤지만 좋은 결과가 나오지 않아서 이렇게 질문을 올립니다. 관련 논문을 소개해주시거나 올려주셨으면 합니다. 부탁드립니다.
  • cloning
  • real-time taqman PCR
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답변 1
  • 답변

    장성재님의 답변

    2010-07-01
    • 0
    본래의 샘플이란 어떤 것을 말씀하시는지? 본래의 샘플이 cDNA를 말씀하시는 것이라면 vector에 클로닝된 타겟 유전자의 농도 (copy number)가 cDNA 상의 농도와 차이를 보이기 때문인 것으로 생각됩니다만.... 타겟의 copy number를 계산해보시면 될 것으로 보입니다. 아시다시피 eal-time RT-PCR은 plasmid DNA를 표준으로 하여 cDNA에 포함된 타겟의 copy number를 정량적으로 확인하는 방법입니다. >t-vector을 사용하여 cloning을 하였습니다. cloning된 sample(플라스미드에 mini prep된 sample)과 본래의 sample을 같이 real-time taqman PCR실험을 하였습니다. > >본래의 sample에서의 조건으로 하였는데 본래의 sample은 25cycle에서 형광이 보이지만 cloning된 sample은 35cycle에서 10-fold로 희석한 sample이 거의 동시에 형광을 나타냅니다. > >cloning된 sample의 조건을 달리 해야하나요?? >몇가지의 조건을 달리해봤지만 좋은 결과가 나오지 않아서 이렇게 질문을 올립니다. > >관련 논문을 소개해주시거나 올려주셨으면 합니다. 부탁드립니다.
    답변수정
    본래의 샘플이란 어떤 것을 말씀하시는지? 본래의 샘플이 cDNA를 말씀하시는 것이라면 vector에 클로닝된 타겟 유전자의 농도 (copy number)가 cDNA 상의 농도와 차이를 보이기 때문인 것으로 생각됩니다만.... 타겟의 copy number를 계산해보시면 될 것으로 보입니다. 아시다시피 eal-time RT-PCR은 plasmid DNA를 표준으로 하여 cDNA에 포함된 타겟의 copy number를 정량적으로 확인하는 방법입니다. >t-vector을 사용하여 cloning을 하였습니다. cloning된 sample(플라스미드에 mini prep된 sample)과 본래의 sample을 같이 real-time taqman PCR실험을 하였습니다. > >본래의 sample에서의 조건으로 하였는데 본래의 sample은 25cycle에서 형광이 보이지만 cloning된 sample은 35cycle에서 10-fold로 희석한 sample이 거의 동시에 형광을 나타냅니다. > >cloning된 sample의 조건을 달리 해야하나요?? >몇가지의 조건을 달리해봤지만 좋은 결과가 나오지 않아서 이렇게 질문을 올립니다. > >관련 논문을 소개해주시거나 올려주셨으면 합니다. 부탁드립니다.
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