지식나눔

HPLC 정량에 대해서 입니다.

HPLc를 이용하여 sample 분석을 하고있는 학생입니다. 특정 peak 정량하고싶은데, 그 peak에 해당되는 물질이 알려진 것이라면, 정량하기가 편한데.. 알려지지 않은 물질의 경우 어떠한 방법으로 정확하게 정량해야하나요?? 최종 목적은 HPLC 분석후 fraction을 받아 MS/MS, NMR을 통해서 물질의 구조를 분석하고 싶습니다. 분석하기 전에 기기에 정해진 농도까지 맞춰야 한다고 들었습니다. 정량하는 방법이 있으면 알려주세요.
  • 정량법
  • HPLC
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답변 1
  • 답변

    조윤환님의 답변

    HPLC로 정량분석을 하려면 함량을 정확하게 알고 있는 표준물질을 이용하여 상태적인 피크면적으로 비교해야 합니다. 즉 검량선을 작성해야 한다는 뜻이죠. 이는 물질마다 검출기에 대한 반응이 다르기 때문입니다. 따라서 어떻게 하든 순도가 높은 표준품을 확보해야 합니다. 정제를 하시든지, 아니면 구조를 알아내서 시약으로 파는 제품이 있으면 구입하시든지.... 만약 구조분석이 정확히 이루어진다면, 산염기 또는 산화환원 적정을 통해 정량도 가능할 겁니다. 이 경우 산염기 적정 또는 산화환원적정 표준품을 이용해 이미 적정액의 표준화(normalization)이 이루어졌기 때문에 그 물질의 표준품이 없어도 가능해지는 것입니다.
    HPLC로 정량분석을 하려면 함량을 정확하게 알고 있는 표준물질을 이용하여 상태적인 피크면적으로 비교해야 합니다. 즉 검량선을 작성해야 한다는 뜻이죠. 이는 물질마다 검출기에 대한 반응이 다르기 때문입니다. 따라서 어떻게 하든 순도가 높은 표준품을 확보해야 합니다. 정제를 하시든지, 아니면 구조를 알아내서 시약으로 파는 제품이 있으면 구입하시든지.... 만약 구조분석이 정확히 이루어진다면, 산염기 또는 산화환원 적정을 통해 정량도 가능할 겁니다. 이 경우 산염기 적정 또는 산화환원적정 표준품을 이용해 이미 적정액의 표준화(normalization)이 이루어졌기 때문에 그 물질의 표준품이 없어도 가능해지는 것입니다.
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