2010-09-01
org.kosen.entty.User@57c88844
장현희(petfrog)
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sigma제품의 Rat tail collagen 을 filtering 한 0.02N acetic acid에 실온에서 녹여 100ug/ml을 만든 후, 6well plate에 2ml 넣고 실온에서 1h incubation 하고 well에 남아 있는 collagen 제거 후, PBS로 2번 정도 washing 하고 cell seeding하였습니다.
그런데 coating하고 collagen 제거 할 때 dish바닥에 결정체가 남아 있더라구요..
좀 달라 진게 있다면 0.02N acetic acid에 녹인 collagen을 filtering 하지 않고 acetic acid만 filtering 했고, 냉장고에서 collagen을 녹였어요...
collagen coating하는 법 알려주세요...
- collagen
- coating
- dish
- plate
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답변 2
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답변
장성재님의 답변
2010-09-03- 0
전반적으로 님의 실험법에 문제점은 없어 보입니다. 처음 파우더 상태의 제품을 녹이실 때 완전히 녹았는지 확인하실 필요가 있습니다. coating하고 collagen 제거할 때 dish 바닥에 결정체가 남아있다고 하셨는데, 결정체인지 응결체인지 확인 바랍니다. 일반적으로 collagen은 중성 이상의 pH에서 그리고 온도가 올라갈수록 응결 (polymerization 또는 겔화)되는 성질을 가지고 있습니다. 완전히 coating에 사용하신 collagen sol.을 제거해 주신 후 PBS로 washing 해주시면 표면에 결정이 생기는 일은 거의 없습니다. 혹여 소량 존재한다고 하여도 실험에 그렇게 지장을 주지는 않습니다. 그리고, PBS로 washing한 후에 실온에서 건조시킨 후 사용하는 것이 일반적입니다만, 간혹 PBS에 포함된 염이 결정을 형성하는 경우도 있으나, 세포를 배양하는 과정에서 없어집니다. >sigma제품의 Rat tail collagen 을 filtering 한 0.02N acetic acid에 실온에서 녹여 100ug/ml을 만든 후, 6well plate에 2ml 넣고 실온에서 1h incubation 하고 well에 남아 있는 collagen 제거 후, PBS로 2번 정도 washing 하고 cell seeding하였습니다. >그런데 coating하고 collagen 제거 할 때 dish바닥에 결정체가 남아 있더라구요.. >좀 달라 진게 있다면 0.02N acetic acid에 녹인 collagen을 filtering 하지 않고 acetic acid만 filtering 했고, 냉장고에서 collagen을 녹였어요... > >collagen coating하는 법 알려주세요... > -
답변
안길홍님의 답변
2010-09-04- 0
첨부 자료를 참조 바랍니다.