2010-10-20
org.kosen.entty.User@67f45881
노정란(ggoljji1)
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ELISA 방법으로 마우스 혈장에서 인슐린을 검출하는 실험 중 문제가 생겨 질문드립니다.
1. capture: rabbit polyclonal Ab
2. blocking: 1% BSA in PBST
3. sample treat
4. detection: mouse monoclonal Ab
5. secondary reagent: anti-mouse IgG conjugated HRP
6. TMB
8. stop solution
모든 과정에서 washing을 수행하였습니다.
발색이 잘 됩니다, 더욱 신기한 것은 duplicate는 잘 됩니다.
그런데 시중에서 판매하는 insulin kit와 똑같은 샘플로 실험해보면,
kit와 결과가 다릅니다. 즉, 다르다는 뜻은 경향 자체가 다릅니다.
2마리의 마우스에서 혈장을 분리해서 위의 프로토콜대로 했을 때 흡광도가 높은 샘플이었다면, kit로 했을 때는 흡광도가 가장 낮고,,, 이런 식입니다.
경향은 같아야 하는 거 아닌가요?
왜 그럴까요? duplicate가 된다는 말은 분명 잘 반응하는 것 아닌지요?
왜 kit와 다른지 모르겠습니다. ㅠ.ㅠ
kit와 다르게 한 점은,
1) kit의 Ab조합은 mouse monoclonal Ab-mouse monoclonal Ab conjugated HRP입니다.
위의 프로토콜보다 한 단계가 생략됩니다.
2) 그리고 또 다른 점은 kit 10 ul의 혈장을 사용하지만 저희가 위의 프로토콜대로 할때에는 100 ul의 혈장을 사용했다는 것입니다.
인슐린은 biotin이나 HRP가 conjugated 되어 있는 Ab가 없어서 위의 프로토콜대로 조합을 했는데,,, 이유를 아시는 분 좀 알려주세요!
- elisa
- insulin
- kit
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각 분야 한인연구자와 현업 전문가분들의 답변을 기다립니다.
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답변 1
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답변
김동현님의 답변
2010-12-21- 0
지금은 해결이 되셨는지 모르겠네요. ELISA는 시험 조건에 따라 결과가 많이 달라지기도 합니다. 우선 항체에 따라서, 즉 항체가 인식하는 epitope 부위에 따라서 결과가 달라질 가능성이 매우 많습니다. 그리고 plate의 바깥쪽 부분의 경우 때로 정확하지 않은 결과가 나타나기도 합니다. 여기 제시된 내용만으로는 정확한 원인을 알기는 어렵네요... ^^; >ELISA 방법으로 마우스 혈장에서 인슐린을 검출하는 실험 중 문제가 생겨 질문드립니다. > >1. capture: rabbit polyclonal Ab >2. blocking: 1% BSA in PBST >3. sample treat >4. detection: mouse monoclonal Ab >5. secondary reagent: anti-mouse IgG conjugated HRP >6. TMB >8. stop solution > >모든 과정에서 washing을 수행하였습니다. > >발색이 잘 됩니다, 더욱 신기한 것은 duplicate는 잘 됩니다. > >그런데 시중에서 판매하는 insulin kit와 똑같은 샘플로 실험해보면, >kit와 결과가 다릅니다. 즉, 다르다는 뜻은 경향 자체가 다릅니다. >2마리의 마우스에서 혈장을 분리해서 위의 프로토콜대로 했을 때 흡광도가 높은 샘플이었다면, kit로 했을 때는 흡광도가 가장 낮고,,, 이런 식입니다. >경향은 같아야 하는 거 아닌가요? > >왜 그럴까요? duplicate가 된다는 말은 분명 잘 반응하는 것 아닌지요? >왜 kit와 다른지 모르겠습니다. ㅠ.ㅠ >kit와 다르게 한 점은, >1) kit의 Ab조합은 mouse monoclonal Ab-mouse monoclonal Ab conjugated HRP입니다. >위의 프로토콜보다 한 단계가 생략됩니다. >2) 그리고 또 다른 점은 kit 10 ul의 혈장을 사용하지만 저희가 위의 프로토콜대로 할때에는 100 ul의 혈장을 사용했다는 것입니다. > >인슐린은 biotin이나 HRP가 conjugated 되어 있는 Ab가 없어서 위의 프로토콜대로 조합을 했는데,,, 이유를 아시는 분 좀 알려주세요!